Πώς να μετρήσετε τη βακτηριακή ανάπτυξη στα πιάτα Petri

Τα βακτήρια καλλιεργούνται σε τρυβλία Petri σε ένα στερεό μέσο γνωστό ως βακτηριακό άγαρ, όπου σχηματίζονται κυκλικές αποικίες. Σε αντίθεση με ένα μεμονωμένο βακτηριακό κύτταρο, μια αποικία είναι μια ομάδα βακτηρίων αρκετά μεγάλη ώστε να είναι ορατή με γυμνό μάτι. Η βακτηριακή ανάπτυξη μπορεί να μετρηθεί με απλή παρατήρηση του αριθμού των αποικιών. Ωστόσο, πιο ποσοτικές μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρήση ενός θαλάμου μέτρησης, ή πιο συχνά, βιώσιμων μετρήσεων πλακών. Το τελευταίο χρησιμοποιείται πιο συχνά καθώς παρέχει επίσης ποιοτικές πληροφορίες, όπως το αποτέλεσμα διαφορετικών συνθηκών ανάπτυξης. Δεδομένου ότι μπορεί να υπάρχουν δισεκατομμύρια βακτήρια σε ένα τρυβλίο Petri, η μέτρηση πρώτα απαιτεί αραίωση του δείγματος έτσι ώστε να είναι δυνατόν να μετρηθεί ο αριθμός των αποικιών.

Σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα, προσθέστε 10 μικρολίτρα της αρχικής βακτηριακής καλλιέργειας σε 90 μικρολίτρα μέσου αραίωσης. Κλείστε το καπάκι του σωλήνα σφιχτά και στροβιλίστε απαλά για να πάρετε ένα ομοιογενές μείγμα. Τώρα το δείγμα είναι το ένα δέκατο της αρχικής του συγκέντρωσης.

instagram story viewer

Μεταφέρετε 10 μικρολίτρα αυτού του νέου δείγματος σε νέο δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει 90 μικρολίτρα μέσου αραίωσης, ανακατέψτε το ξανά. Για άλλη μια φορά, το αποτέλεσμα θα είναι το δείγμα που θα αραιωθεί περαιτέρω - τώρα θα είναι το ένα εκατοστό της αρχικής του συγκέντρωσης. Επαναλάβετε αυτό αρκετές φορές, έως ότου το αρχικό δείγμα αραιωθεί μεταξύ 104 και 1010 φορές. Βεβαιωθείτε ότι κάθε σωλήνας φέρει την κατάλληλη αραίωση, για παράδειγμα 10-1, 10-2 και ούτω καθεξής.

Διανείμετε 10 μικρολίτρα της τελευταίας αραίωσης που ολοκληρώθηκε στην πλάκα άγαρ. Χρησιμοποιώντας το άκρο εξάπλωσης, διανείμετε το βακτηριακό διάλυμα σε ολόκληρη την επιφάνεια της πλάκας άγαρ. Επαναλάβετε αυτό για δύο ακόμη πλάκες. Είναι επίσης κοινό να εκτελέσετε αυτά τα βήματα με άλλα επίπεδα αραίωσης για σύγκριση. Φροντίστε να επισημάνετε τα κάτω μέρη των πλακών. Αντικαταστήστε τα καπάκια σε κάθε πλάκα και αφήστε τα πιάτα άγαρ να στεγνώσουν για αρκετά λεπτά είτε σε ένα εργαστήριο κάτω από μια φλόγα, είτε σε έναν επωαστήρα. Τοποθετήστε τις πλάκες στον επωαστήρα που θα πρέπει να ρυθμιστεί στην κατάλληλη θερμοκρασία για το στέλεχος των βακτηρίων. Αφήστε να αναπτυχθεί για 12 έως 16 ώρες.

Οι αποικίες πρέπει να είναι ορατές μετά από 16 ώρες. Ωστόσο, ορισμένες γενετικές τροποποιήσεις μπορεί να απαιτούν περισσότερο (για παράδειγμα, ανάπτυξη χρώματος). Όταν οι αποικίες είναι παρατηρήσιμες, βγάλτε τις πλάκες και βρείτε αυτές που έχουν μεταξύ 30 και 300 αποικιών. Χρησιμοποιώντας έναν μόνιμο δείκτη, τοποθετήστε μια κουκκίδα στο κάτω μέρος του τρυβλίου Petri - στην πλευρά με το άγαρ, όχι στο καπάκι - όπου ορατή μια αποικία μέσω του άγαρ. Μετρήστε κάθε κουκκίδα δείκτη. Επαναλάβετε για κάθε πιάτο.

Για να μετρηθεί η ποσότητα βακτηρίων στην αρχική καλλιέργεια για αυτό το πείραμα, η αραίωση πρέπει να αντιστραφεί στους υπολογισμούς, σε δύο σημεία. Πρώτον, όταν πήρατε ένα μικρόλιτρο από το δοκιμαστικό σωλήνα για να το βάλετε στο τρυβλίο Petri, πήρατε το ένα δέκατο του αραιωμένου δείγματος, οπότε πρέπει να πολλαπλασιάσετε τα πάντα με 10 για να το αντιστρέψετε. Επιπλέον, εάν ο συντελεστής αραίωσης στο δοκιμαστικό σωλήνα ήταν, για παράδειγμα, 10-7, τότε ο αριθμός των αποικιών πρέπει να πολλαπλασιαστεί επί 107 προκειμένου να αντιστραφεί το αποτέλεσμα αραίωσης. Απλώς αφαιρέστε το αρνητικό σύμβολο από τον εκθέτη στους υπολογισμούς. Χρησιμοποιήστε τον τύπο:

[Αριθμός αποικιών που μετρήθηκαν] × 10 × [πόσες φορές το δείγμα πρέπει να πολλαπλασιαστεί για να φτάσει στην αρχική συγκέντρωση: για παράδειγμα, 105] = Αριθμός μονάδων σχηματισμού αποικίας (CFU) ανά χιλιοστόλιτρο αρχικής καλλιέργειας. Αυτή είναι η βακτηριακή ανάπτυξη στα τρυβλία Petri.

Teachs.ru
  • Μερίδιο
instagram viewer