Agar ist eine geleeartige Substanz, die aus den gereinigten Zellwänden von Rotalgen gewonnen wird. Es wird mikrobiologischen Medien zugesetzt, bei denen es sich um Materialien handelt, auf denen Mikroorganismen im Labor gezüchtet werden, um der Substanz eine festere Struktur zu verleihen. Agar hat keinen Nährwert. Wenn Wissenschaftler es zur Kultivierung von Mikroorganismen verwenden, fügen sie verschiedene Nährstoffe hinzu, um das Bakterienwachstum in Petrischalen oder Reagenzgläsern zu erhöhen. Wenn Forscher Bakterien in einem Reagenzglas lagern, spricht man von einem Agar-Schrägagar, da sich das flüssige Nährmedium verfestigt, während sich das Röhrchen in einer geneigten Position befindet. Ein Schraubverschluss an der Schräge verhindert das Austrocknen des Agars.
Bei Schrägen wird das Medium anders zubereitet als bei Petrischalen. Die Sterilisation erfolgt mit dem Agar in den Röhrchen; Petrischalen werden vorsterilisiert, bevor sterilisierter Agar in sie gegossen wird. Messen Sie die benötigte Wassermenge ab und geben Sie sie in einen Erlenmeyerkolben. Erhitze es auf einem Herd, bis es fast kocht. Fügen Sie bei Bedarf weitere Zutaten hinzu und rühren Sie die Mischung langsam und ständig um, bis sie sich auflösen. Diese Zutaten können je nach Art des zu kultivierenden Mikroorganismus Rindfleischextrakt, Pepton und pH-Puffer umfassen.
Bevor Sie das dehydrierte Agarpulver hinzufügen, mischen Sie es mit einer kleinen Menge kaltem destilliertem Wasser, um eine Klumpenbildung zu vermeiden. Seien Sie vorsichtig, wenn Sie der heißen Flüssigkeit Agar hinzufügen, da es schäumen und den Topf überlaufen kann. Geben Sie jeweils kleine Mengen Agar hinzu und rühren Sie um, um den Agar gleichmäßig zu verteilen. Schalten Sie die Hitze aus, wenn die Mischung zu dampfen beginnt, bevor sie kocht.
Stellen Sie die unverschlossenen Reagenzgläser auf ein Reagenzglasgestell. Füllen Sie die Reagenzgläser, indem Sie etwa 5 Milliliter – etwa 0,17 Unzen oder 1 Teelöffel – des geschmolzenen Agars mit einer sterilen Pipette aus dem Topf geben. Verschließen Sie jedes der Reagenzgläser locker, da der Agar nicht sterilisiert wird, wenn sie fest verschlossen sind. Sterilisieren Sie alle Röhrchen in einem Autoklaven für etwa 25 Minuten bei 121 Grad Celsius oder 250 Grad Fahrenheit.
Wenn der Agar noch heiß ist, kippen Sie das Gestell mit den Reagenzgläsern vorsichtig auf eine feste Oberfläche oder a dickes Buch, wobei darauf zu achten ist, dass das Medium in den Röhrchen schräg zum Test steht Rohre. Lassen Sie das Medium in diesem Winkel abkühlen und verfestigen, wodurch die Oberfläche des Agars vergrößert wird. Ziehen Sie die Kappen der Reagenzgläser fest, nachdem der Agar abgekühlt ist. Nach dem Erstarren des Agars sind die Slants gebrauchsfertig. Sie können zur späteren Verwendung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahrt werden.
Impfen Sie die Schräge, indem Sie Zellen mit einer Impföse von einem Einzelkolonie-Mikroorganismus auf einer Platte auf die Schrägfläche übertragen. Bewegen Sie die Schlaufe über die Oberfläche der Schräge und verschließen Sie die Röhrchen wieder. Inkubieren Sie die Schräge, bis Anzeichen von Wachstum vorhanden sind, und stellen Sie das Röhrchen dann in einen Kühlschrank.