Гел електрофорезата е метод, използван в лабораториите за разделяне ДНК (Дезоксирибонуклеинова киселина). Може да се използва и за разделяне на РНК и протеини.
Четенето на резултатите от гел електрофорезата позволява на изследователите да определят размера на нишките в пробата. За да се разбере как работи процесът, първо трябва да се научи дефиницията на гел електрофорезата.
Определение за гел електрофореза
Гел електрофорезата е мощен инструмент, използван в молекулярна биология за определяне на размера и електрическия заряд на ДНК, РНК и протеини. Започвате с използване на парчета ДНК, усвоени от ензими от по-голяма верига ДНК.
Използвайки интензитета на гел за електрофореза като резултати, можете да разберете какъв е размерът на фрагментите. След това човек може да получи a ДНК пръстов отпечатък.
Както се разкрива „електро” частта на думата, a дефиниция на гел електрофореза предполага използването на електрическо поле. Използва се специална машина, която съдържа буферен разтвор, който покрива електродите, кладенец за гела да се суспендира вътре и самите електроди.
Гелът в гел електрофореза
Гел електрофореза изисква използването на гел, оформен в плоча, обикновено направена от пречистен вариант на агар от водорасли, наречен агароза.
Агарозни гелове направете пореста матрица, през която заредените молекули с различни размери могат да се движат с различна скорост. Химично вещество, наречено етидиев бромид (EtBr), се добавя към разтвора на гела, преди да се излее във форма.
Ако имате много малки ДНК или протеинови молекули за отделяне, може да се наложи да използвате a полиакриламиден гел вместо агароза. Внимавайте, когато използвате полиакриламид, тъй като той е невротоксичен.
Специален гребен се поставя в матрицата с агарозен гел и след това се отстранява внимателно, след като се втвърди. Тук се поставят ДНК фрагментът или други молекулярни проби, като първо се смесват със специална зареждаща боя. The зареждаща боя е просто да се проследи движението на ДНК, тъй като не се вижда по друг начин.
Има и кладенец, който съдържа това, което се нарича a ДНК стълба или маркер. Това служи като висококачествен шаблон с известни размери на лентата, за сравнение на размера с изследваните ДНК проби. След като се приложи електрическото поле, тези отрицателно заредени молекули ще преминат през гела към положителния край.
Резултати от електрофорезата в гела
След като молекулите изминат края на гела, е време за четене резултати от гел електрофореза. Багрилото EtBr в гела се свързва лесно с ДНК, поради което се използва и след това можете да видите ленти от ДНК, които флуоресцират под UV светлина.
Трябва да внимавате много да не докосвате етидиев бромид, тъй като неговият афинитет към ДНК също означава, че може да го развие; следователно се счита за мутаген. Вече се предлагат по-нови, по-безопасни багрила, въпреки че ценовите им точки са по-високи.
UV светлината разкрива интензитета на гел електрофорезата на ДНК или други молекулярни проби. Разположението на лентите върху гел разкрива размера на ДНК фрагмент. The интензивност на лентата за гел електрофореза разкрива концентрацията на молекулата.
Сега можете да сравните лентите на ДНК във вашите проби с пробата на ДНК стълбата. Известните размери на лентата на стълбата ще ви помогнат да определите относителния размер на ДНК, която изучавате.
Значението на качествената гел електрофореза
Гел електрофореза е била използвана в ДНК пръстови отпечатъци и криминалистика. Той е помогнал на изследователите да определят информация за геномите на много видове. Използването на висококачествена гел електрофореза е от съществено значение за тези важни области.
Следователно е от решаващо значение да работите с висококачествени съставки и да полагате големи грижи при направата на гелове. От съществено значение е да се предотврати замърсяването на ДНК проби с РНК или протеини.
Уверете се, че използвате чист буфер, изсипете гела внимателно, така че гнездата му да се образуват равномерно и да поддържате всички реагенти на подходящата температура. Гел електрофореза интензивността на лентата трябва да бъде жива и чиста, без следи от друга ДНК на заден план и без намазки от РНК или протеини, замърсяващи гела.