المكونات الأساسية لجهاز HPLC

الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء هي تقنية للتحليل المختبري للخليط. إنه نوع فعال من اللوني يستخدم الضغط العالي ، بدلاً من الجاذبية ببساطة ، لدفع عينة من خليط عبر عمود. يتم حقن عينة ، ثم تساعد المضخة التي تحتوي على كميات عالية من الضغط على تحريك العينة على طول عمود معبأ ، حيث يتم فصلها إلى مكونات فردية. ثم يتم تحليل هذا الفصل بواسطة كاشف للحصول على نتائج.

لكي يتم حقنها في HPLC ، يجب أولاً إذابة العينة في مذيب سائل قطبي ، ويفضل أن يكون ذلك مع أطياف HPLC معروفة بحيث يمكن تمييز بياناتها عن العينة. يتم وضع المحلول السائل الذي يحتوي على العينة في الجهاز وإرساله إلى العمود. يعتمد الموقع الفعلي لموقع الحقن على العلامة التجارية للأدوات. في معظم الحالات ، تكون عملية الحقن آلية ، ولكن في بعض الحالات يجب على عامل المختبر حقن العينة باستخدام إبرة حقنة صغيرة.

يعد مكون المضخة لوحدة HPLC ضروريًا لأنه يوفر الضغط الذي يدفع العينة عبر العمود. تتنوع قوة المضخة ، لكن القوة القوية يمكن أن تنتج ضغطًا يصل إلى 6000 رطل لكل بوصة مربعة ، والذي يتم تطبيقه بعد حقن العينة. يسمح هذا للعينة بالمرور عبر العمود بسرعة وكفاءة أكبر مما لو كانت تقطر من خلال استخدام قوة الجاذبية فقط.

تسمح السرعة المتزايدة للعينة التي تم تمريرها عبر العمود بواسطة مضخة باستخدام نوع عمود مختلف عن تلك المستخدمة في الفصل الكروماتوجرافي السائل البسيط. يمكن أن يكون لمواد التعبئة في العمود حجم جزيئي أصغر بكثير ، مما يزيد من مساحة السطح وبالتالي يساعد في تفاعل العينة مع العمود. تعمل معظم أعمدة HPLC من خلال قطبية. يتم إذابة العينة في مذيب قطبي ، ويتكون العمود من هيدروكربونات غير قطبية إلى حد كبير. تمر الأجزاء القطبية من جزيء العينة عبر العمود بسرعة كبيرة لأنها تتفاعل بشكل أساسي مع المذيب ، في حين أن المكونات غير القطبية للعينة باقية في العمود ، وتشكل تفاعلات ضعيفة مع العمود عناصر. لذلك ، تخرج مكونات العينة من العمود بالترتيب من معظم القطبية إلى غير القطبية.

تختلف أجهزة الكشف أيضًا بناءً على نوع أداة HPLC المستخدمة. ومع ذلك ، يعمل معظمهم بنفس الطريقة الأساسية. يضيء مصدر الضوء فوق البنفسجي على مكونات العينة المنفصلة عند خروجها من العمود. تمتص معظم المركبات العضوية قدرًا معينًا من الضوء ، لذلك عندما تمر عبر شعاع الضوء المطبق ، يمكن للكاشف التقاط كمية الضوء الممتصة. يقوم الكاشف أيضًا بتسجيل وقت استبقاء المكونات بناءً على الترتيب الذي يتم به خروجها من العمود. يمكن بعد ذلك تحليل هذا الناتج بناءً على منطقة الذروة لتحديد الطبيعة الدقيقة لمكونات العينة.