ارسم مخططًا لتركيز المنتج مقابل الوقت للبيانات من أنبوب الاختبار الأول للمقايسة الأنزيمية. ملاحظة: يجب أن يكون المحور الأفقي "الوقت" ، والمحور الرأسي يجب أن يكون "تركيز المنتج".
احسب خط الانحدار الخطي لنقاط البيانات التي رسمتها في القسم 1 ، الخطوة 1. بينما يمكن لبرنامج Excel والحاسبات الرسومية تحديد هذا النموذج الخطي بسهولة ، يمكنك اشتقاق تقدير للانحدار منحدر الخط بقسمة الفرق في تركيز المنتج بين نقاط البيانات المتجاورة على اختلافها الزمني.
سجل منحدر خط الانحدار الخطي من القسم 1 ، الخطوة 2 على أنه "سرعة التفاعل الأولية (Vo)". ملاحظة: في نموذج خط الانحدار "[تركيز المنتج] = م [الوقت] + ب ،" المعامل "م" هو ميل.
كرر الخطوات 1 و 2 و 3 لبقية أنابيب الاختبار في الفحص.
ارسم معكوس تركيز الركيزة لكل أنبوب اختبار مقابل عكس سرعة رد الفعل الأولية (من القسم 1 ، الخطوة 4). على سبيل المثال ، إذا كانت السرعة الأولية لأنبوب اختبار بتركيز ركيزة أولي قدره 50 ميكرومولار (uM) كان 80 ميكرومتر / ثانية ، ستكون الانعكاسات 1/50 ميكرومتر لتركيز الركيزة و 1/80 ميكرومتر / ثانية للتركيز الأولي ● السرعة. ملاحظة: يجب أن يكون تركيز الركيزة المعكوس على المحور الأفقي ، ويجب أن تكون السرعة الأولية المعكوسة على المحور الرأسي.
ملاحظة: يجب أن يكون تركيز الركيزة على المحور الأفقي ، ويجب أن تكون سرعة التفاعل الأولية على المحور الرأسي.
حدد خط الانحدار الخطي للمخطط الذي رسمته في القسم 2 ، الخطوة 1. ملاحظة: لأنك ستحتاج إلى معرفة تقاطع y لخط الانحدار ، يجب عليك إدخال النقاط من القسم 2 ، الخطوة 1 في برنامج Excel أو آلة حاسبة بالرسوم البيانية واستخدم نمذجة الانحدار المضمنة وظائف.
قسّم 1 على تقاطع y من خط الانحدار الخطي. سيعطيك هذا قيمة مقلوب Vmax ، أقصى سرعة رد فعل للإنزيم. ملاحظة: إذا أخذ نموذج الانحدار الخطي الشكل "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + b" ، فإن قيمة "b" ستكون تقاطع y. قسّم 1 على "b" لحساب معكوس Vmax.
قسّم 1 على النتيجة من القسم 2 ، الخطوة 3 لحساب القيمة الفعلية لـ Vmax.
تحديد تركيز الإنزيم في الفحص الأصلي (انظر البيانات الأولية). ملحوظة: تركيز الإنزيم هو نفسه بالنسبة لجميع أنابيب الاختبار ؛ فقط تركيزات الركيزة تختلف في الفحص.
قسّم Vmax (من القسم 2 ، الخطوة 4) بتركيز الإنزيم (من القسم 2 ، الخطوة 5). النتيجة هي قيمة Kcat.
يتمتع Andy Pasquesi ، مؤلف الإعلانات في شيكاغو ، بخبرة واسعة في الكتابة للسيارات (BMW و MINI Cooper و Harley-Davidson) والخدمات المالية (Ivy Funds و William Blair و T. رو برايس ، مجموعة CME) ، عملاء الرعاية الصحية (أبوت) والسلع الاستهلاكية (سوني ، موتورولا ، نول). وهو حاصل على ليسانس الآداب في اللغة الإنجليزية من جامعة هارفارد ولكنه لا يهتم بفاصلة أكسفورد.