Ваш учитель передає вам зразок бактерій і запитує: Скільки життєздатних мікроорганізмів у цьому зразку? Що це означає, і як ви це зрозуміли? Один метод - це знаходження числа колонієутворюючі одиниці(КУО).
Що таке КУО?
КОЕ відносяться до кількості окремих колоній будь-якого мікроорганізму, які ростуть на пластині середовища. Це значення, у свою чергу, представляє кількість бактерій, здатних до розмноження, оскільки вони утворили колонії на пластині. Існує формула КУО, яка передбачає вибірку.
Як знайти КУО?
Підрахувати кількість бактерій у рідкій пробі дуже складно. Їх занадто багато, і вони занадто малі. Крім того, деякі з них можуть бути мертвими, а інші - живими, і мертві не повинні враховуватися до загальної суми. Вас цікавить лише життєздатний бактерії або бактерії, які можуть розмножуватися. То як ви можете зрозуміти, скільки у вас бактерій?
Так само, як ви можете взяти опитування 1000 людей і застосувати його до 10000 людей, щоб зрозуміти, як вони можуть думати з певної теми. Ви можете спробувати взяти невелику частину оригінального зразка, з’ясувати, скільки бактерій є цю частину, а потім підрахуйте, щоб приблизно визначити, скільки їх могло бути в оригіналі зразок.
Використання розведень для пошуку КУО
Процедура пошуку КУО даного зразка передбачає спочатку розведення цього зразка. Потім розведення висівають на пластини з правильним середовищем для росту. Багаторазові розведення часто є гарною ідеєю, оскільки вихідний зразок може бути дуже концентрованим.
Дозволивши бактеріям рости на пластинах протягом певної кількості часу, окремі колонії рахуються на тарілці. Якщо зразок був занадто концентрованим, то замість окремих колоній ви побачите велику територію, покриту ростом бактерій, яка називається а газон. Це означає, що вам слід додатково розбавити зразок і спробувати вирощувати знову, щоб ви могли бачити окремі колонії.
Оскільки окремі колонії походять від однієї бактерії, яка багаторазово розмножувалась, лише вони зараховуються до КУО.
Експериментальна процедура пошуку КУО
Прикладом використання розведень для розрахунку КУО може бути наступний: По-перше, з початкового зразка, який дає вам учитель, ви берете 1 мл і виставляєте на тарілку. Наступного дня ви бачите, що там газон бактерій. Це означає, що ви не можете порахувати кількість КУО. Наступним кроком є розведення.
Спочатку ви берете 1 мл зразка і розбавляєте його в 9 мл рідкого середовища. Оскільки розведення являє собою одну частину зразка на дев'ять частин розчинника, це називається розведенням 1:10. Потім ви берете 1 мл розведення 1:10 і додаєте його до 9 мл рідкого середовища. Це розведення - розведення 1: 100. Нарешті ви робите розведення 1: 1000, беручи 1 мл розведення 1: 100 і додаючи 9 мл рідкого середовища. Для кожного розведення тепер ви отримуєте 10 мл розведеної культури бактерій.
Виконавши розведення, ви наносите 0,5 мл розведень на тарілки. Обов’язково позначте пластини, якими було розбавлено розведення.
Наступного дня ви повернетесь і побачите, що на всіх плитах є окремі колонії. Ви хочете вибрати тарілку між 30 і 300 колоній. Ви бачите, що пластина для розведення 1: 1000 містить близько 10 колоній, що означає, що ви надмірно розбавили зразок. Ця табличка не допоможе знайти КУО.
Пластина для розведення 1:10 має багато колоній, можливо, більше 300. У цьому випадку ви можете перейти на тарілку 1: 100. Ви підраховуєте колонії на цій тарілці і виявляєте, що в ній 179 колоній. Це означає, що 0,5 мл розведення 1: 100 містить 179 КУО. Але як щодо оригінального зразка?
Що таке розрахунок CFU?
Тепер, коли у вас є деякі дані, ви можете зробити розрахунок КОЕ в оригінальному зразку.
1. Візьміть кількість, яку ви посівали (0,5 мл), і помножте на коефіцієнт розведення (0,01), щоб отримати 0,005. Ви повинні зробити це, щоб знайти коефіцієнт розбавлення, який дав вашу кількість КУО. Тут півмілілітра розведення 1: 100 дозволило порахувати КУО.
2. Розділіть КУО від розведення (179) на результат із етапу 1 (0,005), отримавши 35 800 КУО.
Це означає, що вихідний 1 мл зразка, який був розведений, містить 35 800 КУО. Інший спосіб це сказати - сказати, що вихідний зразок має 35 800 КУО / мл.
КУО - чудовий інструмент для виявлення кількості бактерій, грибів або будь-яких мікроорганізмів у даному зразку. Описаний тут метод покриття особливо корисний для дуже концентрованих зразків або організмів, які погано ростуть у рідкій культурі.