Які недоліки ВЕРХ?

Високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) - це лабораторна техніка, яка використовується для розділення та ідентифікації сполук. Це тип колонкової хроматографії, який спирається на різні полярності сполук у розчині, щоб розділити їх. ВЕРХ відрізняється від звичайної колонкової хроматографії, оскільки використовує тиск для швидшого протікання розчину через колонку, а отже, дає швидші, а іноді і більш точні результати. Мета полягає в тому, щоб розділити сполуки в колонці і змусити їх виходити окремо.

Через швидкість ВЕРХ та залежність від різних полярностей сполук, два сполуки з схожа структура і полярності можуть виходити з хроматографічного апарату одночасно або майже однаково час. Це відоме як коелюція. Спіральність ускладнює визначення, яка саме частина суміші елююється в який момент.

ВЕРХ зазвичай використовує скляну колону, наповнену намистинами, виготовленими з різних матеріалів. Суміші, що просочуються через колонку, мають хімічні речовини, які з різною силою зв’язуються з гранулами. Міцність зв'язування, яка залежить від схожості полярності, визначає, як довго хімічна речовина зв'язуватиметься з кулькою до випуску. Деякі сполуки зв'язуються настільки сильно, що по суті ніколи не вивільняються з гранул у колонці і ніколи не вимірюються в розчині, що виходить з колони.

Типові лабораторні методи розділення включають розробку аналізу або методу поділу, а потім впровадження цього аналізу для відокремлення окремих сполук від розчину. Однак це зазвичай призводить до кількох рішень, які також потребують процедур, що призводить до експоненціального збільшення складності. Хоча ВЕРХ часто може спростити та пришвидшити цей процес, витрати на розробку апарату ВЕРХ можуть стати величезними. Розробка апарату ВЕРХ, хоча і набагато ефективніша, набагато дорожча, ніж розробка інших аналізів для розділення сполук. Це робить його фінансово невигідним для багатьох невеликих приватних лабораторій.

ВЕРХ використовується не тільки для розділення простих сполук, але також для виділення специфічних білків із клітинної суміші. У цьому випадку кульки в колонці зазвичай покриті антитілом, специфічним для білка, який потрібно зібрати. Білки зв'язують антитіла, а залишок розчину пропускають через колонку, потім білки вивільняють за допомогою іншого розчину і збирають. Це вимагає від висококваліфікованого спеціаліста постійно стежити за колоною та переконуватися в тому, що процес працює точно так, як планувалося.

  • Поділитися
instagram viewer