Побудуйте діаграму концентрації продукту в залежності від часу для даних з першої пробірки ферментативного аналізу. Примітка: горизонтальна вісь повинна мати значення "час", а вертикальна вісь повинна бути "концентрація продукту".
Обчисліть лінію лінійної регресії для точок даних, які ви побудували в розділі 1, крок 1. Хоча Excel та графічні калькулятори можуть легко визначити цю лінійну модель, ви можете отримати оцінку регресії нахилу лінії шляхом ділення різниці в концентрації продукту між сусідніми точками даних на їх різницю в часі.
Запишіть нахил лінії лінійної регресії з розділу 1, крок 2 як "початкову швидкість реакції (Vo)". Примітка: у моделі лінії регресії "[концентрація продукту] = m [час] + b", коефіцієнт "m" є схил.
Повторіть кроки 1, 2 і 3 для решти пробірок в аналізі.
Побудуйте графік оберненої концентрації субстрату для кожної пробірки проти оберненої початкової швидкості реакції (з розділу 1, крок 4). Наприклад, якщо початкова швидкість для пробірки з початковою концентрацією субстрату 50 мікромолярів (мкм) становив 80 мкМ / с, інверсії становили б 1/50 мкМ для концентрації субстрату та 1/80 мкМ / с для початкової швидкість. Примітка: зворотна концентрація основи повинна бути на горизонтальній осі, а обернена початкова швидкість повинна бути на вертикальній осі.
Примітка: концентрація субстрату повинна бути на горизонтальній осі, а початкова швидкість реакції повинна бути на вертикальній осі.
Визначте лінію лінійної регресії для діаграми, яку ви побудували в розділі 2, крок 1. Примітка: оскільки для лінії регресії вам потрібно буде знати перетин у, вам слід ввести точки з Розділ 2, крок 1 або в Excel, або в графічний калькулятор і використовуйте вбудоване моделювання регресії функціональність.
Поділіть 1 на y-перетин з лінії лінійної регресії. Це дасть вам значення, обернене до Vmax, максимальної швидкості реакції для ферменту. Примітка: якщо модель лінійної регресії приймає вигляд "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B", тоді значення "b" буде перетином у. Поділіть 1 на "b", щоб обчислити обернену до Vmax.
Розділіть 1 на результат з розділу 2, крок 3, щоб обчислити фактичне значення Vmax.
Визначте концентрацію ферменту у вихідному аналізі (див. Вихідні дані). Примітка: концентрація ферменту однакова для всіх пробірок; лише концентрація субстрату змінюється в аналізі.
Розділіть Vmax (з розділу 2, етап 4) на концентрацію ферменту (з розділу 2, етап 5). Результат - значення Kcat.
Енді Паскесі, чикаго-копірайтер, має великий досвід написання автомобілів (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), фінансових служб (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), клієнти охорони здоров'я (Abbott) та споживчих товарів (Sony, Motorola, Knoll). Він має ступінь бакалавра мистецтв з англійської мови в Гарвардському університеті, але не дбає про оксфордську кому.