Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, bir karışımın laboratuvar analizi için bir tekniktir. Bu, bir karışımın numunesini bir kolondan geçirmek için basitçe yerçekimi yerine yüksek basınç kullanan etkili bir kromatografi türüdür. Bir numune enjekte edilir, ardından yüksek miktarda basınç içeren bir pompa, numunenin ayrı bileşenlere ayrıldığı dolgulu bir kolon boyunca hareket etmesine yardımcı olur. Bu ayırma daha sonra sonuçları elde etmek için bir dedektör tarafından analiz edilir.
Enjeksiyon yeri
Bir HPLC'ye enjekte edilebilmesi için, bir numunenin önce verilerinin numuneden ayırt edilebilmesi için, tercihen bilinen HPLC spektrumlarına sahip bir polar sıvı çözücü içinde çözülmesi gerekir. Numuneyi içeren sıvı solüsyon alete yerleştirilir ve kolona gönderilir. Enjeksiyon bölgesinin gerçek konumu, aletlerin markasına bağlıdır. Çoğu durumda, enjeksiyon işlemi otomatiktir, ancak bazı durumlarda bir laboratuvar çalışanı numuneyi küçük bir şırınga iğnesi kullanarak enjekte etmelidir.
Pompa Bileşeni
HPLC ünitesinin pompa bileşeni, numuneyi kolondan geçiren basıncı sağladığı için gereklidir. Pompa gücü değişir, ancak güçlü olanı, numune enjekte edildikten sonra uygulanan 6.000 psi'ye veya inç kare başına pound'a kadar bir basınç üretebilir. Bu, numunenin yalnızca yerçekimi kuvveti kullanılarak damlamasına kıyasla kolondan daha hızlı ve verimli bir şekilde geçmesine izin verir.
Kolon AÇIKLAMASI
Bir pompa tarafından kolondan geçirilen bir numunenin artan hızı, basit sıvı kromatografisinde kullanılanlardan farklı bir kolon tipinin kullanılmasına izin verir. Kolondaki paketleme malzemesi, yüzey alanını artıran ve dolayısıyla numunenin kolon ile etkileşimlerine yardımcı olan çok daha küçük bir partikül boyutuna sahip olabilir. Çoğu HPLC sütunu polarite üzerinden çalışır. Numune polar bir çözücü içinde çözülür ve kolon büyük ölçüde polar olmayan hidrokarbonlardan oluşur. Numune molekülünün polar kısımları kolondan çok hızlı geçer çünkü bunlar esas olarak molekülle etkileşime girerler. çözücü, oysa numunenin polar olmayan bileşenleri kolonda kalır ve kolonla zayıf etkileşimler oluşturur. bileşenler. Bu nedenle, numunenin bileşenleri en polardan en polar olmayana doğru sırayla kolondan çıkar.
Dedektör İşlevi
Dedektörler ayrıca kullanılan HPLC cihazının türüne göre de değişiklik gösterir. Ancak, çoğu aynı temel şekilde çalışır. Kolondan çıkarken ayrılan numune bileşenlerinin üzerinde bir ultraviyole ışık kaynağı parlar. Çoğu organik bileşik, belirli bir miktarda ışığı emer, böylece uygulanan ışık huzmesinin yanından geçerken, bir dedektör ne kadar ışığın emildiğini algılayabilir. Dedektör ayrıca bileşenlerin kolondan çıkma sırasına göre alıkonma süresini de kaydeder. Bu çıktı daha sonra numunenin bileşenlerinin tam yapısını belirlemek için tepe alanına dayalı olarak analiz edilebilir.