วิธีอ่านเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส

เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นวิธีที่ใช้ในห้องปฏิบัติการเพื่อแยก ดีเอ็นเอ (กรดดีออกซีไรโบนิวคลีอิก). นอกจากนี้ยังสามารถใช้เพื่อแยก RNA และโปรตีน

การอ่านผลเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสช่วยให้นักวิจัยสามารถกำหนดขนาดของเส้นในตัวอย่างได้ เพื่อให้เข้าใจถึงกระบวนการทำงาน ก่อนอื่นต้องเรียนรู้คำจำกัดความของเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส

เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นเครื่องมือที่ทรงพลังที่ใช้ใน อณูชีววิทยา เพื่อกำหนดขนาดและประจุไฟฟ้าของ DNA, RNA และโปรตีน คุณเริ่มต้นด้วยการใช้ชิ้นส่วนของ DNA ที่ย่อยด้วยเอ็นไซม์จากสาย DNA ที่ใหญ่กว่า

ผลลัพธ์ของคุณโดยใช้ความเข้มแถบเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส คุณจะทราบได้ว่าชิ้นส่วนนั้นมีขนาดเท่าใด จากนั้นจะได้รับ a ลายนิ้วมือดีเอ็นเอ.

ตามที่ส่วน "ไฟฟ้า" ของคำเปิดเผย a คำจำกัดความของเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส เกี่ยวข้องกับการใช้สนามไฟฟ้า ใช้เครื่องจักรพิเศษที่มีสารละลายบัฟเฟอร์ซึ่งครอบคลุมอิเล็กโทรด หลุมสำหรับเจลที่จะระงับภายในและอิเล็กโทรดเอง

เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ต้องใช้เจลที่ขึ้นรูปเป็นแผ่นซึ่งปกติทำจากวุ้นบริสุทธิ์จากสาหร่ายที่เรียกว่า agarose

เจลอะกาโรส สร้างเมทริกซ์ที่มีรูพรุนซึ่งโมเลกุลที่มีประจุหลายขนาดสามารถเคลื่อนที่ด้วยความเร็วต่างกัน สารเคมีที่เรียกว่าเอทิเดียมโบรไมด์ (EtBr) ถูกเติมลงในสารละลายเจลก่อนที่จะเทลงในแม่พิมพ์

หากคุณมี DNA หรือโมเลกุลโปรตีนขนาดเล็กมากที่ต้องแยกจากกัน คุณอาจต้องใช้a เจลโพลีอะคริลาไมด์ แทนอากาโรส ระวังเมื่อใช้โพลีอะคริลาไมด์เพราะเป็นพิษต่อระบบประสาท

หวีพิเศษถูกวางลงในแม่พิมพ์เจลอากาโรส แล้วนำหวีออกอย่างระมัดระวังหลังจากที่แข็งตัวแล้ว นี่คือตำแหน่งที่วางชิ้นส่วนดีเอ็นเอหรือตัวอย่างโมเลกุลอื่นๆ โดยตอนแรกผสมกับสีย้อมบรรจุพิเศษ ดิ กำลังโหลดสีย้อม เป็นเพียงการติดตามการเคลื่อนไหวของ DNA เท่านั้น เนื่องจากจะมองไม่เห็นเป็นอย่างอื่น

นอกจากนี้ยังมีบ่อน้ำที่บรรจุสิ่งที่เรียกว่า บันไดดีเอ็นเอ หรือเครื่องหมาย ซึ่งทำหน้าที่เป็นเทมเพลตคุณภาพสูงที่มีขนาดแถบที่รู้จัก สำหรับการเปรียบเทียบขนาดกับตัวอย่าง DNA ที่กำลังศึกษา เมื่อใช้สนามไฟฟ้าแล้ว โมเลกุลที่มีประจุลบเหล่านี้จะเดินทางผ่านเจลไปยังขั้วบวก

เมื่อโมเลกุลเดินทางไปถึงจุดสิ้นสุดของเจลแล้ว ก็ถึงเวลาอ่านค่า ผลลัพธ์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส. สีย้อม EtBr ในเจลจับกับ DNA ได้ง่าย ดังนั้นจึงใช้ จากนั้นคุณจะเห็นแถบของ DNA fluoresce ภายใต้แสงยูวี

คุณต้องระมัดระวังอย่างยิ่งที่จะไม่แตะต้องเอธิเดียมโบรไมด์ เนื่องจากความสัมพันธ์ที่มีต่อ DNA หมายความว่ามันสามารถคลายออกได้ ดังนั้นจึงถือว่าเป็นการกลายพันธุ์ ตอนนี้มีสีย้อมที่ใหม่กว่าและปลอดภัยกว่าแล้ว แม้ว่าราคาจะสูงกว่าก็ตาม

แสงยูวีจะเผยให้เห็นความเข้มแถบเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสของดีเอ็นเอหรือตัวอย่างโมเลกุลอื่นๆ ตำแหน่งของแถบบนเจลเผยให้เห็นขนาดของ ชิ้นส่วนดีเอ็นเอ. ดิ ความเข้มของแถบเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส เผยให้เห็นความเข้มข้นของโมเลกุล

ตอนนี้คุณสามารถเปรียบเทียบแถบของ DNA ในตัวอย่างของคุณกับตัวอย่างแลดเดอร์ของ DNA ได้แล้ว ขนาดวงของบันไดที่รู้จักจะช่วยให้คุณกำหนดขนาดสัมพัทธ์ของ DNA ที่คุณกำลังศึกษา

มีการใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสใน ลายพิมพ์ดีเอ็นเอและนิติวิทยาศาสตร์. ช่วยให้นักวิจัยทราบข้อมูลเกี่ยวกับจีโนมของหลายชนิด การใช้ผลลัพธ์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสคุณภาพสูงเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับสาขาที่สำคัญเหล่านี้

ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญที่จะต้องทำงานกับส่วนผสมคุณภาพสูงและดูแลการผลิตเจลเป็นอย่างดี จำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องป้องกันการปนเปื้อนของตัวอย่าง DNA ด้วย RNA หรือโปรตีน

ตรวจสอบให้แน่ใจว่าใช้บัฟเฟอร์ที่สะอาด เทเจลอย่างระมัดระวังเพื่อให้หลุมหวีมีความสม่ำเสมอและเก็บรีเอเจนต์ทั้งหมดไว้ในอุณหภูมิที่เหมาะสม เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ความเข้มของแถบควรสดใสและสะอาด โดยไม่มีร่องรอยของ DNA อื่นอยู่เบื้องหลัง และไม่มีรอยเปื้อนของ RNA หรือโปรตีนที่ก่อให้เกิดมลพิษต่อเจล