ในเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ตัวอย่างของ DNA หรือโปรตีนจะถูกแยกออก โดยทั่วไปแล้วขึ้นอยู่กับขนาด โดยใช้สนามไฟฟ้าที่ทำให้พวกมันเคลื่อนตัวผ่านเจล การใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นกิจวัตรในห้องปฏิบัติการวิจัยด้านชีวการแพทย์และใช้เพื่อตอบคำถามที่แตกต่างกัน ดังนั้นจึงไม่มีวิธีสากลในการวิเคราะห์ผลลัพธ์จริงๆ
เทคนิคต่างๆ เช่น Western blotting, Northern blotting และ Southern blotting เป็นต้นทั้งหมดที่เกี่ยวข้อง เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส.
หากคุณกำลังทำ เจลอากาโรส อิเล็กโตรโฟรีซิสของตัวอย่าง DNA ซึ่งเป็นขั้นตอนทั่วไป โดยทั่วไปคุณจะต้องทำอย่างน้อยสองสิ่ง: 1) แยกแยะว่าไม่ได้เจียระไน พลาสมิดจากเม็ดมีด พลาสมิดที่มีจุดแข็ง และพลาสมิดที่ตัดแล้ว และ 2) ประมาณขนาดของชิ้นส่วนดีเอ็นเอต่างๆ ด้วยเส้นโค้งมาตรฐาน Excel หรือ เครื่องคิดเลข
ตรวจสอบสมุดบันทึกสำหรับห้องปฏิบัติการของคุณเพื่อดูว่าตัวอย่างใดถูกบรรจุลงในเลนใด เมื่อคุณโหลดหลุมสำหรับเจลของคุณ คุณควรระบุตัวตนของแต่ละเลน/ตัวอย่าง
ใช้ไม้บรรทัดวัดระยะทางบนรูปภาพของคุณจากหลุมไปยังสีย้อมติด ซึ่งจะ ได้เดินทางไกลกว่าแถบ DNA ใดๆ (กล่าวอีกนัยหนึ่ง มันจะอยู่ที่ด้านล่างของ เจล) บันทึกตัวเลขนี้ -- หน่วยที่คุณใช้ไม่สำคัญ
วัดระยะทางบนรูปภาพของคุณจากหลุมไปยังแต่ละแถบใน "บันได" แล้วหารระยะทางนั้นด้วยระยะทางที่เดินทางโดย ติดตามสีย้อม วงดนตรี การคำนวณนี้ช่วยให้คุณมีความคล่องตัวสัมพัทธ์ของแต่ละแบนด์
ตัวอย่าง: สมมติว่าแถบสีย้อมติดตามเดินทาง 6 นิ้ว และเรามีสามแถบที่เดินทาง 5, 4.5 และ 3.5 นิ้ว
ความคล่องตัวสัมพัทธ์ของพวกเขาคืออะไร? คำตอบ: เราหาร 5, 4.5 และ 3.5 ด้วย 6 เพื่อให้ได้ค่าการเคลื่อนที่สัมพัทธ์ที่ 0.833, 0.75 และ 0.5833
ผู้ผลิตให้ขนาดของชิ้นส่วนแต่ละชิ้นในขั้นบันไดที่จัดหาให้คุณ ดังนั้นคุณควรมีข้อมูลนี้อยู่แล้ว
ใช้ฟังก์ชันเส้นแนวโน้มในโปรแกรมสเปรดชีตของคุณเพื่อปรับสมการให้พอดีกับข้อมูล สมการนี้ควรเป็นสมการกำลัง (เช่น x^-2) และควรพอดีกับข้อมูลค่อนข้างดี (ค่าสัมประสิทธิ์ R อย่างน้อย 0.9) สิ่งนี้สร้างเส้นโค้งและเส้นโค้งมาตรฐาน Excel.
จำไว้ว่าชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดเล็กกว่าจะเคลื่อนที่ได้ไกลกว่าเจล DNA ขนาดใหญ่ ดังนั้นชิ้นที่ใกล้กับสีย้อมติดติดตามจะเล็กที่สุด อย่างไรก็ตาม สังเกตว่าถ้า พลาสมิด (วงกลม) DNA ที่ไม่เจียระไน จะกลายเป็น "supercoiled" หรือบิดเป็นเกลียวเหมือนสายโทรศัพท์ ซึ่งจะทำให้เดินทางได้จริง ไกลขึ้น มากกว่า DNA เชิงเส้นที่มีขนาดเท่ากัน
ในทำนองเดียวกัน พลาสมิด "ที่มีรอยบาก" ที่ถูกตัดออกไม่สมบูรณ์ก็จะเดินทาง สั้นลง ระยะทางมากกว่า DNA เชิงเส้นที่มีขนาดเท่ากัน ดังนั้น คุณจึงไม่สามารถประมาณขนาดของพลาสมิดที่ไม่ได้เจียระไนจากเจลของคุณได้
จับคู่วงดนตรีในแต่ละเลนกับข้อมูลประจำตัวของตัวอย่างที่คุณโหลดในเลนนั้นและพิจารณาว่าสิ่งที่คุณเห็นคือสิ่งที่คาดหวังหรือไม่ นี้จะขึ้นอยู่กับลักษณะของการทดสอบของคุณ
อย่างไรก็ตาม โดยทั่วไป หากคุณย่อยพลาสมิดแบบแทรกด้วยเอ็นไซม์จำกัดสองตัว คุณคาดว่าส่วนแทรกจะหลุดออกจากพลาสมิด
เนื่องจากมันมีขนาดเล็กกว่าพลาสมิดมาก คุณจึงคาดหวังว่าจะเห็นแถบสองแถบในเลนนั้น แถบหนึ่งอยู่ใกล้ด้านบนและอีกแถบหนึ่งอยู่ด้านล่างใกล้ด้านล่าง พลาสมิดคัทที่มีเอ็นไซม์จำกัดเพียงหนึ่งเอ็นไซม์ควรสร้างเพียงแถบเดียวที่เคลื่อนที่ได้ไกลกว่าพลาสมิดคัทที่มีสองแถบ เอนไซม์จำกัดแต่ไม่มีที่ไหนใกล้เท่าเม็ดมีด
วัดระยะห่างจากหลุมถึงพลาสมิดที่ตัดแล้วและใส่แถบด้วยไม้บรรทัดของคุณ แบ่งตัวเลขเหล่านี้ด้วยระยะทางที่สีย้อมติดตามเดินทางเพื่อค้นหาการเคลื่อนที่สัมพัทธ์ของเม็ดมีดและพลาสมิดตัด
