เหตุผลในการย้อมสีชิ้นงานด้วยกล้องจุลทรรศน์

เหตุผลหลักที่คุณย้อมชิ้นงานทดสอบก่อนที่จะใส่ไว้ใต้กล้องจุลทรรศน์คือต้องตรวจดูให้ดียิ่งขึ้น แต่การย้อมสีทำมากกว่าการเน้นแค่โครงร่างของเซลล์ คราบบางส่วนสามารถเจาะผนังเซลล์และเน้นองค์ประกอบของเซลล์ และสิ่งนี้สามารถช่วยให้นักวิทยาศาสตร์มองเห็นกระบวนการเผาผลาญอาหาร คราบยังช่วยแยกแยะระหว่างเซลล์ที่มีชีวิตและเซลล์ที่ตายแล้ว นอกจากนี้ การย้อมสียังช่วยให้นักวิทยาศาสตร์สามารถนับจำนวนเซลล์ของชนิดใดชนิดหนึ่งภายในชีวมวลบางชนิดได้ มีคราบสกปรกอยู่มากกว่า 20 ชนิด และแต่ละคราบก็มีจุดประสงค์

ทีแอล; DR (ยาวเกินไป; ไม่ได้อ่าน)

จุดประสงค์หลักของการย้อมสีคือการเน้นเซลล์และส่วนต่างๆ ของเซลล์ คราบต่างๆ มีอยู่มากกว่า 20 ชนิด และประเภทของคราบที่คุณใช้ขึ้นอยู่กับสิ่งที่คุณกำลังมองหา

การเลือกรอยเปื้อนขึ้นอยู่กับสิ่งที่คุณกำลังมองหา คราบบางสีไม่เหมาะกับเซลล์ของสิ่งมีชีวิต แต่คราบที่มีสีน้ำตาลบิสมาร์ก สีแดงโทลูอีน สีน้ำเงินไนล์ และสีแดงไนล์ และสีเรืองแสงบางชนิดที่ใช้เพื่อเน้นดีเอ็นเอ คราบบางจุดเน้นที่สปอร์ บางคราบตรวจพบไขมันและโปรตีน และบางส่วนจะเปลี่ยนสีเมื่อมีแป้ง จุดประสงค์ของการตรวจสอบจะเป็นตัวกำหนดประเภทของคราบที่ดีที่สุดที่จะใช้ ตัวอย่างเช่น ผู้ประกอบวิชาชีพทางการแพทย์ที่ทำการตรวจ PAP จะใช้ Eosin Y. เป็นสีย้อมเรืองแสงที่เป็นกรด ซึ่งจะเปลี่ยนเป็นสีแดงเมื่อสัมผัสกับเซลล์เม็ดเลือดแดง ไซโตพลาสซึม และเยื่อหุ้มเซลล์ นอกจากนี้ยังใช้ในการทดสอบไขกระดูก

ในบางกรณี ผู้วิจัยอาจใช้รอยเปื้อนมากกว่าหนึ่งครั้ง ตัวอย่างเช่น hematoxylin เป็นคราบที่ทำให้นิวเคลียสของเซลล์เป็นสีน้ำเงิน เมื่อใช้ร่วมกับ eosin ซึ่งจะทำให้ส่วนอื่นๆ ของเซลล์เปลี่ยนเป็นสีแดงหรือชมพู จะทำให้เกิดคอนทราสต์ที่เข้มขึ้นและทำให้นิวเคลียสแยกแยะได้ง่ายขึ้น การตรวจ PAP และตัวอย่างจากไขกระดูกจะง่ายต่อการตรวจสอบเมื่อใช้คราบทั้งสองนี้ร่วมกัน

คราบแกรม: เจ้าหน้าที่โรงพยาบาลใช้คราบแกรมเพื่อระบุแบคทีเรียที่เป็นอันตราย นี่เป็นชุดของสารให้สีที่มีผลต่อแบคทีเรียประเภทต่างๆ และให้เครื่องมือวินิจฉัยที่สำคัญแก่แพทย์ รอยเปื้อนของแกรมเป็นกระบวนการสามส่วน ในตอนแรก คริสตัลไวโอเล็ตของ Hucker ถูกเติมเข้าไป ซึ่งทำให้แบคทีเรียทั้งหมดมีสีม่วงสม่ำเสมอ ในขั้นต่อไปจะมีการเติมคราบไอโอดีน ซึ่งทำให้สีเกาะติดกับเซลล์แกรมบวก ซึ่งโดยหลักแล้ว Staphylococcus และ Streptococcus คราบนั้นถูกชะล้างออกไป ปล่อยให้เซลล์แกรมบวกมีสีม่วงชัดเจน จากนั้นจึงแนะนำคราบที่สาม Safranine O เพื่อเพิ่มความคมชัดระหว่างแบคทีเรียแกรมลบกับวัสดุที่เหลือในสไลด์

เมื่อเตรียมชิ้นงานทดสอบบนสไลด์ คุณสามารถติดตั้งแบบแห้งหรือแบบเปียก คุณสามารถหั่นเป็นชิ้นบาง ๆ หรือทาได้ เมื่อใช้รอยเปื้อน ขั้นตอนปกติคือการติดตั้งชิ้นงานทดสอบแบบเปียก ซึ่งหมายถึงการวางหยดน้ำบนสไลด์ วางชิ้นงานทดสอบในน้ำ และปิดด้วยแผ่นปิด จากนั้นใช้หยดหยดที่มุมของสไลด์แล้วปล่อยให้หยดไปทางตัวอย่างโดยการกระทำของเส้นเลือดฝอย ช่วยวางกระดาษทิชชู่ไว้ด้านตรงข้ามของสไลด์เพื่อดึงดูดน้ำ เมื่อคราบเลอะไปทั่วทั้งสไลด์แล้ว ชิ้นงานทดสอบก็พร้อมสำหรับการตรวจสอบ