น้ำซุปสารอาหารเหลวใช้ในการเพาะเชื้อแบคทีเรียเช่น Escherichia coli สูตรสำหรับน้ำซุปนี้จะแตกต่างกันไปตามสายพันธุ์ของแบคทีเรียและการดัดแปลงพันธุกรรม เช่น การดื้อยาปฏิชีวนะ น้ำซุปสามารถทำให้แข็งตัวได้โดยการเพิ่มวุ้น ซึ่งช่วยให้แบคทีเรียสร้างอาณานิคมที่แตกต่างกัน ในขณะที่ในวัฒนธรรมของเหลว พวกมันจะกระจายไปทั่วปริมาตร นี่เป็นเทคนิคพื้นฐานแต่จำเป็นสำหรับวิธีการขั้นสูง เช่น การโคลนยีนหรือการตรวจทางจุลชีววิทยา บทความนี้อนุมานว่าสายพันธุ์ Escherichia coli ในห้องปฏิบัติการมาตรฐานจะต้องได้รับการเพาะเลี้ยงบนจานวุ้น Luria broth (LB) (หรือจานเพาะเชื้อ)
ชั่งน้ำหนักทริปโทนเกรดแบคทีเรีย 10 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 5 กรัม โซเดียมคลอไรด์ 5 กรัม วุ้นหรืออากาโรส 15 กรัม และโซเดียมไฮดรอกไซด์ 1 มิลลิลิตร 1 มิลลิลิตร ผสมสิ่งเหล่านี้กับปริมาตรของน้ำกลั่นและฆ่าเชื้อที่นึ่งฆ่าเชื้อแล้วจนได้ตัวกลาง 1 ลิตร นึ่งสื่อในขวดหรือขวดที่มีฝาปิดหลวมๆ เป็นเวลา 25 นาที ปล่อยให้เย็นลงประมาณ 50 องศาเซลเซียส ก่อนเติมรีเอเจนต์ที่จะถูกทำลายด้วยความร้อนสูง เช่น ยาปฏิชีวนะหรืออาหารเสริมอื่นๆ
ปล่อยให้สื่อนึ่งฆ่าเชื้อเย็นถึง 50 องศาเซลเซียสและไม่ต่ำกว่า 45 องศาเซลเซียส เนื่องจากวุ้นจะเซ็ตตัวในภาชนะก่อนจึงจะเทได้ หาจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อและเทให้เพียงพอเพื่อให้ครอบคลุมพื้นที่ผิวทั้งหมดของจานและอย่างน้อยครึ่งหนึ่งของความลึก หลีกเลี่ยงการเติมจานมากเกินไป และควรอย่าให้วุ้นสัมผัสกับขอบด้านบนของจาน ปล่อยให้แผ่นเปลือกโลกแข็งตัวในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อ (เช่น ใต้ฝากระโปรงหน้าแบบลามิเนต) โดยเปิดฝาทิ้งไว้ที่มุมของฝากระโปรงหน้า
เช็ดจานให้แห้ง แม้ว่าจะสามารถใช้เพลตได้ทันทีที่ตั้งค่า แต่ความชื้นบางส่วนจะปรากฎบนพื้นผิวของวุ้น ซึ่งจะป้องกันไม่ให้แบคทีเรียเกาะติดแน่นเพียงพอ ดังนั้นจึงควรเช็ดจานให้แห้งก่อนทาแบคทีเรีย เช่น ปล่อยทิ้งไว้ที่ อุณหภูมิห้องเป็นเวลาสองสามวันหรือครึ่งชั่วโมงภายใต้เครื่องดูดควันแบบลามิเนตหรือใน 37 องศาเซลเซียส ตู้ฟัก.
เก็บจาน. แผ่นที่แห้งควรวางซ้อนกัน (คว่ำ) บนฝาแล้วนำกลับเป็นต้นฉบับ บรรจุภัณฑ์ ปิดเทป และห่อด้วยกระดาษฟอยล์เพื่อป้องกันแสงหรือตามความเหมาะสม ภาชนะ เขียนวันที่เตรียมลงบนจานเสมอ และหลีกเลี่ยงการใช้หากจานมีอายุมากกว่า 2 เดือน
อ้างอิง
- "โปรโตคอลปัจจุบันในอณูชีววิทยา"; Karen Elbing และ Roger Brent; 2002
เคล็ดลับ
- ดำเนินการตามขั้นตอนข้างต้นให้มากที่สุด (ควรทั้งหมด) ภายในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อ (เช่น ภายใต้ เปลวไฟหรือเครื่องดูดควันแบบเคลือบ) เพื่อหยุดการปนเปื้อนของแบคทีเรียในอากาศไม่ให้เข้ามาและเติบโตใน สื่อ
เกี่ยวกับผู้เขียน
Palmer Owyoung สำเร็จการศึกษาศิลปศาสตรมหาบัณฑิตสาขาธุรกิจระหว่างประเทศจาก University of California at San Diego และ a ศิลปศาสตรบัณฑิตสาขาสังคมวิทยาจากมหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียที่ซานตาบาร์บาร่าและเป็นโมเลกุลที่ได้รับการฝึกอบรม นักชีววิทยา เขาเป็นนักเขียนอิสระมาตั้งแต่ปี 2549 นอกเหนือจากการเขียนแล้ว เขายังเป็นนักเทรด Forex เต็มเวลาและนักการตลาดทางอินเทอร์เน็ต
เครดิตภาพ
รูปภาพ Jupiterimages / Comstock / Getty