วิธีการนับอาณานิคมในจุลชีววิทยา

วิธีคลาสสิกวิธีหนึ่งในการหาความเข้มข้นของจุลินทรีย์ในตัวอย่างคือการเจือจางตัวอย่าง ขยายจุลินทรีย์บนจาน และนับโคโลนี จุลินทรีย์ที่เคลือบแล้วเติบโตจากหน่วยการก่อรูปอาณานิคมซึ่งประกอบด้วยเซลล์หนึ่งเซลล์หรือมากกว่าไปเป็นอาณานิคมที่มองเห็นได้ซึ่งสามารถมองเห็นและนับได้ แบคทีเรียเป็นจุลินทรีย์ที่พบได้บ่อยที่สุดในการประเมินโดยใช้การนับจาน การนับโคโลนีใช้เพื่อตรวจจับและนับจุลินทรีย์ในดิน น้ำ และอาหาร โปรโตคอลสำหรับการนับอาณานิคมเน้นวิธีการที่ถูกต้องและเป็นระบบ

หากคุณเพียงแค่ทาตัวอย่างจุลินทรีย์บนจานวุ้น คุณจะเห็นหน่วยที่ก่อตัวเป็นอาณานิคมจำนวนมากที่แต่ละอาณานิคมจะผสมผสานเข้าด้วยกัน ทำให้ไม่สามารถนับได้ ในการแก้ปัญหานี้ ให้ผสมตัวอย่างลงในตัวกลางที่เป็นของเหลว นำส่วนผสมนั้นจำนวนเล็กน้อยแล้วเจือจางต่อไป ทำซ้ำขั้นตอนนี้หกถึง 10 ครั้ง กระจายการเจือจางสุดท้ายบนจานวุ้นและฟักเป็นเวลาสี่ถึงเจ็ดวันก่อนที่คุณจะนับอาณานิคม

เคล็ดลับหลักในการนับอาณานิคมคือการนับแต่ละจุดอาณานิคมหนึ่งครั้ง วิธีหนึ่งคือการตั้งค่าจานเพาะเชื้อบนพื้นหลังกริดและนับโคโลนีในแต่ละเซลล์กริด โดยเคลื่อนที่ในรูปแบบที่เป็นระเบียบผ่านเซลล์ทั้งหมด การทำเครื่องหมายโคโลนีที่นับไว้ที่ด้านหลังของจานเพาะเชื้อก็เป็นวิธีที่มีประโยชน์เช่นกัน โดยทั่วไป คุณจะต้องนับจานอย่างน้อยสามจาน ใช้จานที่มีอาณานิคม 30 ถึง 300 ตัวเท่านั้นในการอนุมานที่มีประสิทธิภาพ กล่าวโดย Microbiology Network ซึ่งเป็นบริษัทที่ให้บริการให้คำปรึกษาแก่ห้องปฏิบัติการและผู้ผลิต จานที่มีโคโลนีจำนวนมากเกินกว่าจะนับได้หรือมีโคโลนีน้อยเกินไปจำเป็นต้องชุบใหม่จากการเจือจางใหม่

ข้อผิดพลาดของมนุษย์เพิ่มเวลาที่เกี่ยวข้องกับการนับอาณานิคมด้วยตนเอง เพื่อปรับปรุงทั้งความแม่นยำและประสิทธิภาพ ให้วางจานเพาะเชื้อในอุปกรณ์นับโคโลนีอัตโนมัติ เคาน์เตอร์อาณานิคมอัตโนมัติจะถ่ายภาพจาน แยกโคโลนีออกจากพื้นหลัง จากนั้นใช้อัลกอริทึมในการนับโคโลนีบนจาน อัลกอริธึมอาจมีปัญหาในการแยกแยะอาณานิคมเมื่อโคโลนีสองตัวขึ้นไปแตะกันที่ขอบ ดังนั้นนี่คือพื้นที่ของการพัฒนาซอฟต์แวร์ที่กำลังดำเนินอยู่

ความแม่นยำในการคำนวณความหนาแน่นของจุลินทรีย์จากการนับอาณานิคมนั้นมีข้อจำกัดบางประการ หน่วยที่ก่อตัวเป็นอาณานิคมสามารถเป็นเซลล์เดียว สายโซ่ของเซลล์ หรือทั้งกอเซลล์ สมมติฐานคือโคโลนีเป็นตัวแทนของเซลล์เดียว ดังนั้นความเข้มข้นที่คำนวณจากการนับโคโลนีอาจต่ำ จุลินทรีย์ที่แตกต่างกันต้องการสภาวะการเจริญเติบโตที่แตกต่างกัน และโคโลนีบนจานเป็นตัวแทนของจุลินทรีย์ที่เจริญเติบโตบนตัวกลางการเจริญเติบโตนั้นภายใต้สภาวะฟักตัวเหล่านั้นเท่านั้น นอกจากนี้ การนับโคโลนีไม่ได้ลงทะเบียนเซลล์ที่ตายแล้ว ซึ่งเป็นข้อพิจารณาที่สำคัญเมื่อคุณต้องการความเข้มข้นของเซลล์ในตัวอย่างเดิม