Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) เป็นวิธีการทางชีวเคมีในการระบุโปรตีนในสารละลาย ดังที่แสดงโดย Mathews et al ใน "Biochemistry" ตัวอย่างโปรตีนจะถูกบรรจุลงใน "หลุม" หรือรูที่ปลายด้านหนึ่งของบล็อกเจลโพลีอะคริลาไมด์ จากนั้นสนามไฟฟ้าจะถูกนำไปใช้กับเจล SDS ที่เติมลงในตัวอย่างที่บรรจุจะลบล้างประจุตามธรรมชาติของโปรตีน ด้วยเหตุนี้ น้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนเพียงอย่างเดียวจึงกำหนดความเร็วการย้ายถิ่นของโปรตีนขณะที่พวกมันเคลื่อนผ่านเจลไปยังขั้วที่มีประจุบวก Bitesize Bio กล่าว โปรตีนหลายตัวในตัวอย่างเดียวกันจะแยกออกจากกันและย้ายไปยังตำแหน่งที่ต่างกัน
ปรับทิศทางภาพถ่ายเจล "ด้านบน" คือที่ตั้งของบ่อน้ำที่มีการเพิ่มตัวอย่างเดิม "ด้านล่าง" คือตำแหน่งที่ตัวอย่างย้ายไปและส่วนใหญ่มักประกอบด้วยหน้าสีย้อมที่ระบุด้านหน้าการย้ายถิ่นของตัวอย่าง ด้านซ้ายหรือด้านขวาควรมี "เครื่องหมาย" ซึ่งใช้เป็นแนวทางน้ำหนักโมเลกุลที่คาดการณ์ได้
ติดฉลากตัวอย่างสำหรับแต่ละเลน ด้านบนสุด ตัวอย่างที่เพิ่มลงในหลุมจะมีการอพยพในแนวตั้งใน "เลน" ดังนั้น แถบทั้งหมดที่มองเห็นได้ในคอลัมน์แนวตั้งจึงมาจากตัวอย่างเดียวที่โหลดไว้ด้านบนโดยตรง ใช้ไม้บรรทัดและปากกาเพื่อใส่เส้นขอบบนเลน หากมองเห็นคอลัมน์ได้ยาก
ติดฉลากขนาดโมเลกุลของแถบในเลนเครื่องหมาย มาร์กเกอร์ที่มีจำหน่ายทั่วไปมาพร้อมกับรูปภาพของรูปแบบสายคาดที่คาดหวังพร้อมกับน้ำหนักโมเลกุลของแต่ละแถบ แถบเป็นแถบ "แถบ" ขอบฟ้ามืด ซึ่งเป็นโปรตีนย้อมติดที่ฝังอยู่ในเจลจริงๆ
ลากเส้นแสงแนวนอนที่ยื่นออกมาจากแถบเครื่องหมายแต่ละแถบไปยังขอบด้านตรงข้ามของเจล ระวังให้เส้นเหล่านี้ขนานกับบ่อน้ำและด้านหน้าสีย้อม เส้นเหล่านี้บ่งชี้ตำแหน่งที่โปรตีนของน้ำหนักโมเลกุลที่ระบุโดยแถบเครื่องหมายแต่ละแถบจะอยู่ในแต่ละเลน ตัวอย่างเช่น วงในเลน 4 ที่อยู่ใต้เส้นที่ขยายจาก 25 กิโลดัลตัน แถบเครื่องหมายแนะนำว่าเลน 4 มีขนาดเกือบแต่ไม่ถึง 25 กิโลดัลตันในโมเลกุล น้ำหนัก.
ติดฉลากแต่ละแถบในแต่ละเลนด้วยน้ำหนักโมเลกุลโดยประมาณ ใช้เครื่องหมายเป็นแนวทาง และประมาณค่าระหว่างขนาดเครื่องหมาย
ใต้รูปถ่ายเจล ให้เขียนรายการ "โปรตีน" สำหรับแต่ละเลน เริ่มต้นด้วยการระบุสิ่งที่ทราบเกี่ยวกับตัวอย่างแต่ละตัวอย่าง เช่น ที่มาหรือเงื่อนไข จากนั้นระบุน้ำหนักโมเลกุลโดยประมาณของแต่ละแถบในเลน เลนที่มีแถบเดียวแสดงว่าตัวอย่างมีโปรตีนเพียงตัวเดียว เลนที่มีหลายแถบบ่งชี้ว่ามีโปรตีนหลายชนิด แบนด์ที่วิ่งด้วยหน้าการโยกย้ายมีขนาดเล็กกว่าที่แนะนำโดยเครื่องหมายที่ใกล้ที่สุด และอาจคาดเดาไม่ได้ยกเว้นว่า "เล็กกว่า" ที่เครื่องหมายระบุ
ในรายการโปรตีน ให้สังเกตสิ่งแปลกประหลาด ลักษณะที่ปรากฏ "เปื้อน" อาจบ่งชี้ว่ามีโปรตีนมากเกินไป หรือความหนืดของตัวอย่างส่งผลต่อการย้ายถิ่นของมัน หากแถบดูเหมือนเกิน ขอบของเลนหรือค่อนข้างใหญ่เมื่อเทียบกับแถบอื่น ๆ แล้วความเข้มข้นของโปรตีนนั้นน่าจะสูงเกินไปและควรจะเจือจางในอนาคต อิเล็กโตรโฟรีซิส โทนสีเทาทั่วทั้งเลนซึ่งเข้มกว่าสีเจลพื้นหลัง บ่งบอกถึงเศษโปรตีนที่แยกไม่ออก
กำหนดเอกลักษณ์ของโปรตีนในแต่ละเลน แม้ว่าจะทำโดยใช้น้ำหนักโมเลกุลเท่านั้น แต่แหล่งที่มาของแต่ละเลนก็น่าจะบ่งบอกถึงเบาะแสเช่นกัน พิจารณาว่าภายใต้เงื่อนไขบางประการ โปรตีนสามารถรักษาความสัมพันธ์ของ dimer หรือ trimer บนเจลได้ ดังนั้น โปรตีนหนึ่งชนิดอาจปรากฏบนเจลเป็นแถบที่แตกต่างกันสามแถบ แม้ว่าจะไม่สามารถระบุโปรตีนได้ แต่ความมืดสัมพัทธ์ของแถบนั้นสามารถบอกเป็นนัยถึงความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย สามารถแยกโปรตีนที่อยากรู้อยากเห็นและไม่รู้จักได้โดยตรงจากเจลดั้งเดิมและส่งไปเพื่อระบุตัวตน
สิ่งที่คุณต้องการ
- รูปถ่ายของเจล SDS-PAGE, เปื้อน
- คีย์สำหรับมาร์กเกอร์น้ำหนักโมเลกุลที่ใช้
- ไม้บรรทัด
- ปากกา