โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) เป็นเทคนิคในห้องปฏิบัติการที่ใช้ในการแยกและระบุสารประกอบ เป็นประเภทของคอลัมน์โครมาโตกราฟีที่ต้องอาศัยขั้วต่าง ๆ ของสารประกอบในสารละลายเพื่อแยกพวกมันออกจากกัน HPLC แตกต่างจากคอลัมน์โครมาโตกราฟีมาตรฐานเนื่องจากใช้แรงกดเพื่อบังคับสารละลายผ่านคอลัมน์ได้เร็วยิ่งขึ้น ดังนั้นจึงให้ผลลัพธ์ที่รวดเร็วกว่าและแม่นยำกว่าในบางครั้ง เป้าหมายคือการแยกสารประกอบในคอลัมน์ออกและแยกออกต่างหาก
เนื่องจากความเร็วของ HPLC และขึ้นอยู่กับขั้วที่แตกต่างกันของสารประกอบ สารประกอบสองชนิดที่มี two โครงสร้างและขั้วที่คล้ายกันสามารถออกจากเครื่องโครมาโตกราฟีได้ในเวลาเดียวกันหรือใกล้เคียงกัน เวลา. นี้เรียกว่า coelution Coelution ทำให้กำหนดได้อย่างแม่นยำว่าส่วนใดของส่วนผสมที่ถูกชะออก ณ จุดที่ยาก
โดยทั่วไปแล้ว HPLC จะใช้คอลัมน์แก้วที่บรรจุลูกปัดที่ทำจากวัสดุต่างกัน ส่วนผสมที่ถูกบังคับผ่านคอลัมน์มีสารเคมีที่จับกับเม็ดบีดที่มีความแข็งแรงต่างกัน ความแข็งแรงของการยึดเกาะ ซึ่งขึ้นอยู่กับความคล้ายคลึงกันของขั้ว เป็นตัวกำหนดว่าสารเคมีจะจับกับลูกปัดนานแค่ไหนก่อนที่จะถูกปล่อยออกมา สารประกอบบางชนิดจับกันแน่นมากโดยพื้นฐานแล้วจะไม่หลุดออกจากเม็ดบีดในคอลัมน์และไม่เคยวัดในสารละลายที่ออกจากคอลัมน์
เทคนิคการแยกสารในห้องปฏิบัติการโดยทั่วไปเกี่ยวข้องกับการพัฒนาชุดทดสอบหรือวิธีการแยก จากนั้นจึงนำการทดสอบไปใช้เพื่อแยกสารประกอบแต่ละชนิดออกจากสารละลาย อย่างไรก็ตาม การทำเช่นนี้มักส่งผลให้มีวิธีแก้ปัญหาหลายอย่างที่ต้องดำเนินการตามขั้นตอน ซึ่งนำไปสู่ความซับซ้อนที่เพิ่มขึ้นแบบทวีคูณ แม้ว่า HPLC มักจะทำให้กระบวนการนี้ง่ายขึ้นและเร็วขึ้น แต่ต้นทุนในการพัฒนาเครื่องมือ HPLC ก็อาจมีจำนวนมาก การพัฒนาเครื่องมือ HPLC แม้ว่าจะมีประสิทธิภาพมากกว่ามาก แต่ก็มีค่าใช้จ่ายสูงกว่าการพัฒนาชุดทดสอบอื่นๆ สำหรับการแยกสารประกอบ สิ่งนี้ทำให้ไม่สามารถทางการเงินได้สำหรับห้องปฏิบัติการเอกชนขนาดเล็กหลายแห่ง
HPLC ไม่เพียงแต่ใช้เพื่อแยกสารประกอบอย่างง่ายเท่านั้น แต่ยังใช้เพื่อแยกโปรตีนที่จำเพาะออกจากส่วนผสมของเซลล์อีกด้วย ในกรณีนี้ เม็ดบีดในคอลัมน์มักจะเคลือบด้วยแอนติบอดีจำเพาะสำหรับโปรตีนที่คุณต้องการเก็บ โปรตีนจับแอนติบอดีและสารละลายที่เหลือจะถูกส่งผ่านคอลัมน์ จากนั้นโปรตีนจะถูกปล่อยออกมาโดยใช้สารละลายอื่นและเก็บรวบรวม ต้องใช้ช่างเทคนิคที่มีทักษะสูงเพื่อตรวจสอบคอลัมน์ตลอดเวลา และตรวจสอบให้แน่ใจว่ากระบวนการทำงานตรงตามที่วางแผนไว้