Att beräkna titer för ett virus är ett komplicerat sätt att säga att en forskare räknar antalet virus i ett visst prov. För att beräkna virustitrar infekterar forskare plattor med växande bakterier med virala lösningar i varierande koncentrationer och räkna ut antalet virus i den ursprungliga lösningen genom att räkna de bakterier som har dött på grund av viruset infektion.
Ta på dig handskar, fyll 10 odlingsrör med 9 ml buljong och märk dem "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" och så vidare tills “10 ^ -10.” Dessa rör kommer att användas för virala serieutspädningar som används för att beräkna fag titer. Eftersom virus kan växa till otroligt höga koncentrationer måste du späda dem för att räkna dem effektivt. Varje rör representerar en tiofaldig utspädning av viruset.
Ta 1 ml av den blandade kulturen från röret märkt "10 ^ -1" och överför det med en ny pipett till nästa rör, märkt "10 ^ -2." Blanda också detta rör.
Fortsätt detta mönster för att skapa en seriell utspädningsserie. Du kommer att sluta med 9 rör om 9 ml och 1 rör om 10 ml. Virusbelastningarna i dina rör kommer att spädas var som helst från 10 gånger (ditt första rör) eller 100 gånger (ditt andra rör) till tio miljarder gånger (ditt slutliga rör).
Lägg till två droppar bakteriekultur i din agar och blanda den försiktigt. Dessa är de bakterier som kommer att dödas, så att du kan räkna antalet viruspartiklar i en viss lösning.
Tillsätt 1 ml av varje seriell utspädning till motsvarande agarrör medan rören fortfarande finns i varmvattenbadet. Exempelvis ska 1 ml av din 10 ^ -1 seriella utspädning gå in i agarröret märkt "10 ^ -1."
Blanda varje rör och häll sedan varje rör i petriskålen med motsvarande etikett. Detta skapar ett tunt lager agar som har ympats med bakterier och virus i varje platta. Låt plattorna växa över natten i en inkubator.
Ta dina tallrikar ur inkubatorn och undersök dem. Du bör se molniga områden i hela plattan där bakterier har vuxit, förutom små klara fläckar som kallas plack. Dessa plack är fläckar av döda bakterier, och varje plack representerar ett virus.
Ta antalet plack på din tallrik och multiplicera med 10. Om du räknade 157 plack skulle du få 1570.
Multiplicera numret som du fick i föregående steg med det inversa av numret på utspädningsröret. Till exempel, om plattan du valde var 10 ^ -5-plattan skulle du multiplicera 1570 med 10 ^ 5 för att få 157000000. Det sista numret är din fagtiter och representerar antalet virus per ml av din ursprungliga kultur.