TA-kloning är en enkel och bekväm metod för subkloning av polymeraskedjereaktionsprodukter (PCR). "TA" är förkortning för "tymin" och "adenin." Denna kloningsteknik utnyttjar förmågan hos tymin att hybridisera till adenin i närvaro av ligaser. Restriktionsenzymer används inte, till skillnad från den traditionella subkloningsmetoden. Istället amplifieras PCR-produkter med Taq-polymeraser-enzymer.
Metod
TA-kloningsmetoden använder den terminala transferasaktiviteten för vissa deoxiribonukleinsyraöverhäng till varje ände av PCR-produkten.
En linjäriserad kloningsvektor med enkla, tre prime-T (3'-T) överhäng kallade en T-vektor används för att klona denna PCR-produkt i en plasmidvektor. PCR-produkten blandas i hög andel med denna vektor.
DNA-ligas (T4-ligas) tillsätts till blandningen, vilket gör det möjligt för de två produkterna att hybridisera och sammanfoga.
Fördelar och nackdelar
TA-kloning är en bekväm metod för att subklona PCR-produkter i den linjära vektorn, och det är mycket enklare och snabbare än traditionella subkloningsmetoder. Eftersom denna metod inte använder restriktionsenzymer kan produkter utan restriktionsenzymställen klonas.
En nackdel är att TA-kloningssatser är mycket dyra och därför är deras användning begränsad. Dessutom finns det ingen riktad kloning; så sannolikheten för kloning i motsatt riktning är större.
TA-kloningssatser
Flera tillverkare säljer TA-kloningssatser. Vissa är Invitrogen, QIAGEN och Premier Biosoft.