Western blot-testet, även kallat immunblotting, är ett test för ett specifikt protein i en proteinblandning. Western blot-testet utförs efter gelelektrofores eller ett enzym-länkat immunosorbentanalys (ELISA) -test, och det använder antikroppar för att identifiera specifika proteiner.
Natriumdodecylsulfatpolyakrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE) är ett vanligt test som används för att separera proteiner för användning i Western blot. Proteinerna separeras efter vikt och elektriska egenskaper när de rör sig genom en gelmatris.
ELISA-testet använder enzymer eller antikroppar fästa på en fast yta för att skapa testytan. Ett prov tillsätts sedan till testytan. Antikroppar eller enzymer som reagerar eller fäster vid proteiner indikerar ett positivt resultat.
Western blot-testet utförs efter gelelektroforesen. De separerade proteinerna överförs (eller torkas) till nitrocellulosa eller nylonmembran och identifieras av specifika antikroppar som är märkta av ett sekundärt protein.
Western blot-testet används för att bekräfta positiva resultat från antingen gelelektrofores- eller ELISA-test. Western blot-testet kan identifiera proteiner mer specifikt och kan utesluta falska positiva effekter.