Buffertlösningar motstår förändringar i pH eftersom de innehåller svaga syrabas-konjugat som neutraliserar H + och OH-joner. Buffertlösningar består av svaga syror eller baser och saltet av den syran eller basen. Val av lämpligt buffersystem beror på pH-området för buffring. De flesta biologiska reaktioner inträffar vid ett pH-intervall från 6 till 8. Fosfatbuffertar buffrar över pH-intervallet 6,5 till 7,5. Karboxylsyrabuffertar är användbara från pH 3 till 6. Boratbuffertar fungerar från pH 8,5 till 10. Aminosyrabuffertar såsom glycin och histidin fungerar över en mångfald av pH-intervall. Tris-buffert är ett av de vanligaste buffertsystemen i biologilaboratorier. Beräkningar för en Tris-buffertlösning kommer att användas i följande exempel, men metoden gäller för alla buffertlösningar.
Använd produkten av den slutliga lösningen molaritet och volym för att bestämma mol bas krävs. Till exempel, om 2 liter av en 0,1 M lösning av Tris-buffert behövs, är antalet mol Tris som krävs:
Beräkna den buffertmassa som krävs genom att multiplicera antalet mol som behövs med basens molekylvikt. Till exempel är massan på 0,2 mol Tris-bas lika med:
Lös upp basen i destillerat vatten med hjälp av en magnetisk omrörare och omrörningsplatta. Lös upp den i en volym vatten endast något mindre än den slutliga lösningsvolymen (950 till 975 ml för varje liter slutlig lösning). Tris-buffertens pH ändras med koncentrationen och behöver justeras om en för liten initial volym används. Det är också bäst att förbereda bufferten vid samma temperatur som den kommer att användas under analysen eller experimentet eftersom Tris har stora temperaturberoende förändringar i pH.
Tips
- För att spara tid när du förbereder en buffertlösning kan du använda färdiga buffertkoncentrat vid önskat pH och späd för önskad molaritet och volym. Förbered buffertlösning vid samma temperatur som den kommer att användas för att undvika betydande pH-förändringar. Undvik tidskrävande pH-justeringar, titreras endast efter utspädning till önskad koncentration. Upplösning i för liten volym leder till upprepade titreringar.
Varningar
- Var försiktig när du hanterar syror och baser. Använd skyddsglasögon.
Om författaren
Carla Boulianne är en evolutionsbiolog av utbildning och frilansskribent av passion. Förutom att skriva för Demand Studios och eHow är hon spelförfattare för Föräldraskap till ett begåvat barn på Suite101.com. Hon är glad över att utforska nya ämnen genom omfattande forskning.
Fotokrediter
Foto med tillstånd av Emmi P. @ morgueFile.com