Högpresterande vätskekromatografi är en teknik för laboratorieanalys av en blandning. Det är en effektiv typ av kromatografi som använder högt tryck, snarare än bara gravitation, för att driva ett prov av en blandning genom en kolonn. Ett prov injiceras, sedan hjälper en pump som innehåller stora mängder tryck att flytta provet längs en packad kolonn, där den separeras i enskilda komponenter. Denna separation analyseras sedan av en detektor för att ge resultat.
Injektionsplats
För att injiceras i en HPLC måste ett prov först upplösas i ett polärt flytande lösningsmedel, företrädesvis ett med kända HPLC-spektra så att dess data kan särskiljas från provets. Vätskelösningen som innehåller provet placeras i instrumentet och skickas in i kolonnen. Den faktiska platsen för injektionsstället beror på instrumentmärket. I de flesta fall är injektionsprocessen automatiserad, men i vissa fall måste en laboratoriearbetare injicera provet med en liten sprutnål.
Pumpkomponent
Pumpkomponenten i HPLC-enheten är nödvändig eftersom den ger det tryck som driver provet genom kolonnen. Pumpstyrkan varierar, men en kraftfull kan producera ett tryck på upp till 6000 psi, eller pund per kvadrattum, som appliceras efter att provet injiceras. Detta gör att provet kan passera genom kolonnen snabbare och mer effektivt än om det skulle droppa genom att bara använda tyngdkraften.
Kolumnbeskrivning
Den ökade hastigheten för ett prov som passerar genom kolonnen av en pump möjliggör användning av en annan typ av kolonn än de som används vid enkel vätskekromatografi. Förpackningsmaterialet i kolonnen kan ha en mycket mindre partikelstorlek, vilket ökar ytarean och därmed hjälper interaktioner mellan provet och kolonnen. De flesta HPLC-kolumner arbetar genom polaritet. Provet löses i ett polärt lösningsmedel och kolonnen består av i stort sett opolära kolväten. De polära delarna av provmolekylen passerar mycket snabbt genom kolonnen eftersom de främst interagerar med medan provets icke-polära komponenter dröjer kvar i kolonnen och bildar svaga interaktioner med kolonnen komponenter. Därför kommer provets komponenter från kolonnen i ordning från mest polära till mest opolära.
Detektorfunktion
Detektorer varierar också beroende på vilken typ av HPLC-instrument som används. De flesta fungerar dock på samma grundläggande sätt. En källa för ultraviolett ljus lyser på de separerade provkomponenterna när de kommer ut från kolonnen. De flesta organiska föreningar absorberar en viss mängd ljus, så när de passerar den applicerade ljusstrålen kan en detektor plocka upp hur mycket ljus som absorberas. Detektorn registrerar också komponenternas retentionstid baserat på i vilken ordning de kommer ut från kolumnen. Denna effekt kan sedan analyseras baserat på topparea för att bestämma den exakta arten av provets komponenter.
