Главни разлог због којег мрљете примерак пре него што га ставите под микроскоп је бољи поглед, али бојење чини много више од једноставног истицања обриса ћелија. Неке мрље могу продрети у ћелијске зидове и истакнути ћелијске компоненте, а то научницима може помоћи да визуализују метаболичке процесе. Мрље такође помажу у разликовању живих ћелија од мртвих. Штавише, бојење омогућава научницима да броје број ћелија одређеног типа унутар одређене биомасе. Постоји двадесет или више различитих врста мрља, а свака има своју сврху.
ТЛ; ДР (предуго; Нисам прочитао)
Главна сврха бојења је истицање ћелија и делова ћелија. Постоји преко 20 различитих врста мрља, а врста мрља које користите зависи од онога што тражите.
Врсте мрља
Избор мрље зависи од онога што тражите. Нису све мрље погодне за живе ћелије, али оне укључују Бисмарцк смеђу, толуенско црвену, Нилску плаву и Нилску црвену, као и одређене флуоресцентне лампице које се користе за истицање ДНК. Неке мрље истичу споре, неке откривају липиде и протеине, а неке мењају боју у присуству скроба. Сврха прегледа одређује најбољу врсту мрља за употребу. На пример, лекар који спроводи ПАП брис користио би Еосин И. То је кисела флуоресцентна боја која постаје црвена када контактира црвене крвне ћелије, цитоплазму и ћелијске мембране. Такође се користи за испитивање крвне сржи.
У неким случајевима истражитељ може користити више мрља. На пример, хематоксилин је мрља која језгра ћелија претвара у плаву. Када се користи заједно са еозином, који друге делове ћелије претвара у црвено или ружичасто, пружа јачи контраст и олакшава разликовање језгара. ПАП мрље и узорке крвне сржи лакше је испитати када се ове две мрље користе заједно.
Грамова мрља: Болнички радници користе Грамову мрљу за идентификацију штетних бактерија. Ово је заправо серија боја, која имају различит ефекат на различите врсте бактерија и лекарима дају важан дијагностички алат. Грамова мрља је троделни поступак. У прву се додаје Хуцкерова кристална љубичица која свим бактеријама боји једноличну љубичасту боју. У следећој фази додаје се јодна мрља, што доводи до лепљења боје на грам-позитивне ћелије, а то су првенствено стафилокок и стрептокок. Мрља се испере, остављајући грам-позитивне ћелије изразито љубичасте боје; затим се уводи трећа мрља, Сафранин О, да би се појачао контраст између грам-негативних бактерија и остатка материјала на стаклу.
Поступак бојења
Када припремате примерак на тобогану, можете га монтирати на суво или мокро, можете га исећи на танак део или га размазати. Када се користи мрља, уобичајени поступак је монтирање узорка мокрим поступком, што значи да се капица воде стави на тобоган, узорак стави у воду и покрије покривачем. Затим капаљком нанесете мрљу на угао стакла и допустите да се капиларним дејством повуче према узорку. Помаже стављање папирнатог пешкира на супротну страну тобогана да привуче воду. Када се мрља рашири по целом дијапозитиву, узорак је спреман за испитивање.