Вестерн блот, аналитичка техника која се користи за одређивање одређеног протеина у датом узорку, користи способност ензима или примарно антитело обележено флуоресценцијом да се веже за његов специфични антиген. То је процес у три корака који започиње гелском електрофорезом, праћен мембранским блотирањем и сондирањем антителима. Откривање протеина може бити директно или индиректно, при чему последње користи обележено секундарно антитело усмерено против примарног. Иако је прихваћен као рутинска техника анализе протеина, вестерн блот има ограничења као и користи.
Предност: Осетљивост
Један од највећих аргумената у корист вестерн блота је његова осетљивост. Због своје способности да у узорку открије само 0,1 нанограма протеина, техника теоретски може да послужи као ефикасан алат за рану дијагностику, који открива и најмањи имуногени одговор вируса или бактерије код пацијента узорак. Индиректни вестерн блот се даље надовезује на ову осетљивост из способности секундарног антитела да појача интензитет сигнала који детектује систем за обраду слике. Већа осетљивост значи да је за тестирање потребно мање антитела, што значајно смањује лабораторијске трошкове.
Предност: Специфичност
Вестерн блот техника своју специфичност дугује двама значајним факторима. Прво, гел електрофореза сортира узорак на протеине различите величине, наелектрисања и конформације. Овај процес је сам по себи огроман корак ка откривању, јер траке формиране у гелу већ дају назнаке о величини протеина или полипептида од интереса. Специфичност интеракције антитело-антиген служи као други велики фактор. Будући да специфична антитела показују афинитет према одређеним протеинима, процес може селективно да детектује циљни протеин чак и у смеши од 300 000 различитих протеина.
Недостатак: склон лажним или субјективним резултатима
Упркос својој осетљивости и специфичности, вестерн мрља и даље може дати погрешне резултате. Лажно позитивни резултати када антитело реагује са протеином који није намењен, што је често дешава се када пацијент који се тестира на ХИВ има туберкулозу или већи број паразита инфекције. С друге стране, лажно негативни могу лако настати ако се већим протеинима не да довољно времена да се правилно пренесу на мембрану. Неправилно упијање и обрада често производе искривљене, избледеле или чак вишеструке траке, што резултате испитивања подлеже тумачењу техничара.
Недостатак: висока цена и техничка потражња
Трошкови Вестерн блот-а саставни су део великих индивидуалних трошкова за обележена антитела, квалификоване аналитичаре и лабораторијску опрему. Деликатни поступак, вестерн блот захтева прецизност у сваком кораку за правилну идентификацију састојака узорка. Мала грешка у концентрацији реагенса или у периоду инкубације може бити погубна за читав процес. Коначно, опрема потребна за откривање и сликање - хемилуминесцентни, флуоресцентни, радиоактивни или ласерски системи за откривање - може бити прескупа за просечну микробиолошку јединицу.
