Један од класичних начина одређивања концентрације микроба у узорку је разблаживање узорка, узгајање микроба на плочама и бројање колонија. Покривени микроби израстају из јединице која формира колонију која се састоји од једне или више ћелија у видљиву колонију која се може видети и избројати. Бактерије су најчешћи микроби за процену помоћу броја плоча. Бројање колонија користи се за откривање и бројање микроба у земљи, води и храни. Протоколи за бројање колонија истичу тачан и методичан приступ.
Разређивање узорака, облагање и инкубација
Ако једноставно намажете узорак микроба на плочицу агара, видећете толико јединица које формирају колоније да ће се појединачне колоније спојити, што их чини немогућим за бројање. Да бисте решили овај проблем, умешајте узорак у течни медијум, узмите малу количину те смеше и даље је разблажите. Поновите овај поступак шест до 10 пута. Коначно разблажење распоредите на агар плочу и инкубирајте га четири до седам дана пре него што избројите колоније.
Ручно бројање
Примарни трик у бројању колонија је бројање сваке тачке једном. Један од приступа је постављање Петријеве посуде на мрежну позадину и бројање колонија у свакој мрежној ћелији, крећући се у методичном обрасцу кроз све ћелије. Означавање пребројаних колонија на полеђини Петријеве посуде такође може бити користан приступ. Генерално, мораћете да избројите најмање три плоче; Користите само плоче које садрже 30 до 300 колонија да бисте направили снажне закључке, предлаже Мицробиологи Нетворк, фирма која пружа консултантске услуге лабораторијама и произвођачима. Плоче са колонијама које су премале за бројање или са премало колонија треба поново пресадити из новог разблажења.
Аутоматско бројање
Људска грешка додаје време укључено у ручно бројање колонија. Да бисте побољшали тачност и ефикасност, ставите Петријеву посуду у аутоматизовани уређај за бројање колонија. Аутоматизовани бројачи колонија сликају јело, одвајају колоније од позадине, а затим користе алгоритам за бројање колонија на тањиру. Алгоритми могу имати потешкоћа у разликовању колонија када се две или више колонија додирују на ивицама, тако да је ово подручје сталног развоја софтвера.
Чињење компликованијег бројања
Тачност израчунавања густине микроба из броја колонија има одређена ограничења. Јединице које формирају колоније могу бити једна ћелија, ланац ћелија или цела гомила ћелија. Претпоставка је да колонија представља једну ћелију, па концентрације израчунате из броја колонија могу бити ниске. Различитим микробима су потребни различити услови раста, а колоније на плочи представљају само оне микробе који успевају на том растном медијуму под тим условима инкубације. Поред тога, бројање колонија не региструје мртве ћелије, што је важно када вам треба концентрација ћелија у оригиналном узорку.