Лисе је реч која долази из грчког и значи само „раздвојити се“ или „пукнути“. Тачно, термини односи се на оно што се дешава са ћелијама у пуферу за лизу, решење које их отвара да би се издвојиле садржај. Научници користе пуфере за лизу при вађењу ДНК или протеина из ћелија за анализу, посебно у случају бактерија. Тип пуфера за лизу ћелија варира у зависности од врсте експеримента, мада су следећи неки уобичајени избори.
ТЛ; ДР (предуго; Нисам прочитао)
Пуфери за лизу помажу у разбијању отворених ћелија, тако да се њиховом садржају може приступити или уклонити. Неки примери укључују соли, детерџенте, хелатне агенсе и инхибиторе и неке алкалне хемикалије.
Пуфер и сол
Пуфери стабилизују пХ док се ћелије цепају. Трис-ХЦЛ је једна од најчешћих хемикалија за пуферовање при пХ 8. ХЕПЕС је још једна уобичајена пуферска хемикалија у овим експериментима. Сол натријум хлорида такође може повећати јонску снагу, укупну концентрацију растворених супстанци ван ћелија. Ова последња тачка има одређени значај, јер вода може да дифундира кроз ћелијске мембране из подручја са ниском концентрацијом растворених супстанци у регионе са високом концентрацијом растворених супстанци.
Растварајући детерџенти
Детерџенти растварају ћелијске мембране како би садржај ћелије могао да побегне. Имају и амфипатску молекуларну структуру (тј. Молекули са једним крајем који лако ступа у интеракцију са молекулима воде, док други хидрофобни или онај који „страхује од воде“ нема). Масти могу да растворе стварањем мицела, малих гроздова где хидрофобни репови молекула детерџента показују према молекулима масти. Уобичајени детерџенти укључују натријум додецил сулфат или СДС, НП-40 и тритонКс.
Хелатни агенси и инхибитори
Пуфери за лизу такође укључују хелатна средства попут етилендиаминтетрасирћетне киселине (ЕДТА) или етилен гликол тетрацетне киселине (ЕГТА). Ове хемикалије се везују за металне јоне са два позитивна наелектрисања (нпр. Магнезијум и калцијум), чинећи их недоступним за друге реакције. Многе ДНК (протеини који жваћу ДНК) и протеазе (протеини који секу остале протеине) требају магнезијумове јоне да би па им лишавањем овог кључног састојка ЕДТА и ЕГТА помажу у смањењу нивоа протеазе или ДНАсе активност. Међутим, они то не искључују у потпуности, а неке протеазе не зависе од кофактора магнезијума, па пуфери за лизу понекад укључују и хемикалије зване инхибитори протеазе, које се везују за протеазе и спречавају њихово функционисање прописно.
Алкална лиза
Алкална лиза, врло честа техника за пречишћавање плазмида од бактерија, укључује три решења. Прва садржи глукозу, трис-ХЦЛ пуфер, ЕДТА и РНАзе. Глукоза ствара високу концентрацију растворене супстанце ван бактерија, тако да постају мало млитаве, што им олакшава лизирање. ЕДТА и трис-ХЦЛ функционишу као што је већ описано, док ће РНАза жвакати било коју РНК унутар ћелије да би је склонила са пута. Друго решење заправо лизира ћелије. Овај садржи СДС детерџент и НаОХ, који подиже пХ на 12 или више, денатурацијом протеина унутар ћелије и узрокујући одвајање ДНК у појединачне ланце. Трећи раствор садржи калијум ацетат за враћање пХ на неутралнији ниво, тако да се ланци плазмидне ДНК могу поново спојити. У међувремену, денатурисани протеини се скупљају и таложе, док додецил-сулфатни јони долазе заједно са јонима калијума да би се створило нерастворљиво једињење, које се такође таложи из раствора.