Výpočet titra pre vírus je komplikovaný spôsob, ako povedať, že vedec počíta počet vírusov v konkrétnej vzorke. Na výpočet vírusových titrov vedci infikujú platne rastúcich baktérií vírusovými roztokmi v rôznych koncentráciách a spočítajte počet vírusov v pôvodnom roztoku spočítaním baktérií, ktoré na vírus zomreli infekcie.
Nasaďte si rukavice, naplňte 10 kultivačných skúmaviek 9 ml bujónu a označte ich „10 ^ -1“, „10 ^ -2“, „10 ^ -3“ a tak ďalej až do „10 ^ -10“. Tieto skúmavky sa použijú na vírusové sériové riedenia použité na výpočet fágov titer. Pretože vírusy môžu narásť do neuveriteľne vysokých koncentrácií, musíte ich zriediť, aby ste ich mohli efektívne počítať. Každá skúmavka predstavuje desaťnásobné zriedenie vírusu.
Vezmite 1 ml zmiešanej kultúry z skúmavky označenej „10 ^ -1“ a preneste ju novou pipetou do ďalšej skúmavky označenej „10 ^ -2“. Zmiešajte tiež túto tubu.
Pokračujte v tomto vzore a vytvorte sériu sériových riedení. Nakoniec dostanete 9 tub s 9 ml a 1 tubu s 10 ml. Vírusová záťaž vo vašich skúmavkách bude zriedená kdekoľvek od 10-krát (vaša prvá skúmavka) alebo stokrát (vaša druhá skúmavka) až po desať miliárdkrát (vaša posledná skúmavka).
Pridajte dve kvapky bakteriálnej kultúry na váš agar a jemne ju premiešajte. Toto sú baktérie, ktoré budú usmrtené, čo vám umožní spočítať počet vírusových častíc v konkrétnom roztoku.
Pridajte 1 ml každého sériového riedenia do príslušnej skúmavky s agarom, zatiaľ čo skúmavky sú stále v kúpeli s horúcou vodou. Napríklad 1 ml vášho sériového zriedenia 10 ^ -1 by malo ísť do agarovej skúmavky označenej „10 ^ -1“.
Zmiešajte každú skúmavku a potom každú skúmavku nalejte do Petriho misky s príslušným štítkom. Takto sa vytvorí tenká vrstva agaru, ktorá bola naočkovaná baktériami a vírusmi v každej platni. Doštičky nechajte cez noc rásť v inkubátore.
Vyberte misky z inkubátora a preskúmajte ich. Na celej doske by ste mali vidieť zakalené oblasti, kde rástli baktérie, okrem malých jasných miest nazývaných plaky. Tieto plaky sú škvrny mŕtvych baktérií a každý plak predstavuje jeden vírus.
Vezmite počet plakov na tanieri a vynásobte ich 10. Keby ste napočítali 157 plakov, dostali by ste 1570.
Vynásobte číslo, ktoré ste dostali v predchádzajúcom kroku, inverziou čísla na zrieďovacej skúmavke. Napríklad ak by ste vybrali platňu 10 ^ -5, platbu vynásobíte číslom 1570 a 10 ^ 5, čím získate 157000000. Toto konečné číslo je váš titer fágov a predstavuje počet vírusov na ml pôvodnej kultúry.