Ваш учитель передает вам образец бактерий и спрашивает: сколько жизнеспособных микроорганизмов в этом образце? Что это значит и как понять? Один из способов - найти количество колониеобразующие единицы(КОЕ).
Что такое КОЕ?
КОЕ относятся к количеству отдельных колоний любого микроорганизма, которые растут на чашке со средой. Это значение, в свою очередь, представляет количество бактерий, способных к репликации, поскольку они образовали колонии на планшете. Существует формула КОЕ, которая предполагает отбор проб.
Как найти КОЕ?
Подсчитать количество бактерий в жидкой пробе очень сложно. Их слишком много, и они слишком малы. Кроме того, некоторые из них могут быть мертвыми, а другие живыми, и мертвые не должны учитываться при подсчете суммы. Вас интересует только жизнеспособный бактерии или бактерии, которые могут размножаться. Так как же узнать, сколько у вас бактерий?
Точно так же, как вы можете провести опрос 1000 человек и применить его к 10 000 человек, чтобы выяснить, как они могут думать об определенном предмете. Вы можете попробовать взять небольшую часть исходного образца, чтобы выяснить, сколько бактерий в эту часть, а затем вычислите, чтобы приблизительно определить, сколько их могло быть в оригинале образец.
Использование разведений для поиска КОЕ
Процедура поиска КОЕ в данном образце включает в себя сначала разбавление этого образца. Затем разведения высевают на чашки с подходящей питательной средой. Многократные разведения часто являются хорошей идеей, поскольку исходный образец может быть очень концентрированным.
После того, как бактерии будут расти на пластинах в течение определенного времени, отдельные колонии подсчитываются на тарелке. Если образец был слишком концентрированным, вместо отдельных колоний вы увидите большую площадь, покрытую ростом бактерий, которая называется лужайка. Это означает, что вам следует дополнительно разбавить образец и снова попробовать выращивать, чтобы увидеть отдельные колонии.
Поскольку отдельные колонии происходят от одной бактерии, которая многократно реплицировалась, только они учитываются в КОЕ.
Экспериментальная процедура определения КОЕ
Пример использования разведений для расчета КОЕ может выглядеть следующим образом: Во-первых, из первоначальной пробы, которую дает вам ваш учитель, вы берете 1 мл и кладете его на чашки. На следующий день вы видите лужайку бактерий. Это означает, что вы не можете подсчитать количество КОЕ. Следующим шагом будет разбавление.
Сначала вы берете 1 мл образца и разводите его в 9 мл жидкой среды. Поскольку разведение представляет собой одну часть образца на девять частей разбавителя, это называется разведением 1:10. Затем вы берете 1 мл разведения 1:10 и добавляете его к 9 мл жидкой среды. Это разведение составляет 1: 100. Наконец, вы делаете разведение 1: 1000, беря 1 мл разведения 1: 100 и добавляя 9 мл жидкой среды. Для каждого разведения теперь у вас есть 10 мл разведенной бактериальной культуры.
После завершения разведения вы переносите 0,5 мл разведения на чашки. Обязательно пометьте чашки, на которые было нанесено разведение.
На следующий день вы возвращаетесь и видите, что на всех пластинах есть отдельные колонии. Вы хотите выбрать тарелку между 30 и 300 колоний. Вы видите, что на планшете для разведения 1: 1000 содержится около 10 колоний, это означает, что вы чрезмерно разбавили образец. Эта пластина не поможет найти КОЕ.
На чашке с разведением 1:10 много колоний, может быть, более 300. В этом случае вы можете перейти на пластину 1: 100. Вы подсчитываете колонии на этой чашке и обнаруживаете, что в ней 179 колоний. Это означает, что 0,5 мл разведения 1: 100 содержит 179 КОЕ. А как же оригинальный образец?
Что такое расчет КОЕ?
Теперь, когда у вас есть некоторые данные, вы можете выполнить расчет КОЕ в исходном образце.
1. Возьмите посевное количество (0,5 мл) и умножьте на коэффициент разбавления (0,01), чтобы получить 0,005. Вы должны сделать это, чтобы найти коэффициент разбавления, который дал ваше количество КОЕ. Здесь половина миллилитра разведения 1: 100 позволила вам посчитать КОЕ.
2. Разделите КОЕ из разведения (179) на результат этапа 1 (0,005), чтобы получить 35 800 КОЕ.
Это означает, что исходный 1 мл разбавленного образца содержит 35 800 КОЕ. Другими словами, исходная проба содержит 35 800 КОЕ / мл.
КОЕ - отличный инструмент для определения количества бактерий, грибков или любых микроорганизмов в данном образце. Описанный здесь метод посева особенно полезен для очень концентрированных образцов или организмов, которые плохо растут в жидкой культуре.