Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) - это лабораторный метод, используемый для разделения и идентификации соединений. Это тип колоночной хроматографии, в которой используются различные полярности соединений в растворе для их разделения. ВЭЖХ отличается от стандартной колоночной хроматографии, поскольку в ней используется давление для более быстрого проталкивания раствора через колонку и, следовательно, более быстрые, а иногда и более точные результаты. Цель состоит в том, чтобы разделить соединения в столбце и заставить их выходить отдельно.
Из-за скорости ВЭЖХ и зависимости от различных полярностей соединений два соединения с аналогичная структура и полярность могут выходить из хроматографического аппарата одновременно или почти в одно и то же время. время. Это называется коэлюцией. Соэлюирование затрудняет точное определение того, какая часть смеси элюировалась в какой момент.
В ВЭЖХ обычно используется стеклянная колонка, заполненная шариками из разных материалов. Смеси, проталкиваемые через колонку, содержат химические вещества, которые с разной силой связываются с шариками. Сила связывания, которая зависит от сходства полярности, определяет, как долго химическое вещество будет связываться с шариком до высвобождения. Некоторые соединения связываются настолько прочно, что они практически никогда не высвобождаются из шариков в колонке и никогда не измеряются в растворе, выходящем из колонки.
Типичные лабораторные методы разделения включают разработку анализа или метода разделения с последующим применением этого анализа для отделения отдельных соединений от раствора. Однако это обычно приводит к множеству решений, которые также должны проходить процедуры, что приводит к экспоненциальному увеличению сложности. Хотя ВЭЖХ часто может упростить и ускорить этот процесс, затраты на разработку устройства для ВЭЖХ могут стать огромными. Разработка аппарата для ВЭЖХ, хотя и намного более эффективного, намного дороже, чем разработка других анализов для разделения соединений. Это делает его финансово невыгодным для многих небольших частных лабораторий.
ВЭЖХ используется не только для разделения простых соединений, но также для выделения определенных белков из клеточной смеси. В этом случае шарики в колонке обычно покрыты антителом, специфичным к белку, который необходимо собрать. Белки связываются с антителами, и оставшийся раствор пропускают через колонку, затем белки высвобождаются с использованием другого раствора и собираются. Для этого требуется высококвалифицированный специалист, который постоянно будет следить за колонкой и следить за тем, чтобы процесс протекал точно так, как планировалось.
