Electroforeza pe gel este una dintre metodele majore utilizate în biologia moleculară pentru analiza ADN-ului. Această metodă implică migrarea fragmentelor de ADN printr-un gel, unde acestea sunt separate în funcție de mărime sau formă. Cu toate acestea, chiar și o metodă științifică, solidă, cum ar fi electroforeza pe gel, nu este imună la erori.
Cum funcționează electroforeza
•••Jezperklauzen / iStock / Getty Images
Electroforeza pe gel implică utilizarea unui gel realizat de obicei din polimeri precum agaroză. Gelul este scufundat într-o soluție tampon care conduce un câmp electric. Eșantionul de ADN de interes este mai întâi fragmentat folosind enzime de restricție și apoi este injectat în gel. Când câmpul electric este pornit, fragmentele de ADN din gel migrează spre electrodul pozitiv. Dacă fragmentele de ADN sunt de dimensiuni diferite, atunci timpul de migrare va fi diferit pentru fiecare fragment de dimensiune. Fragmentele sunt apoi vizualizate folosind un colorant sau autoradiografie și sunt vizibile ca benzi în gel.
Contaminarea probei
•••aiaikawa / iStock / Getty Images
Aplicația majoră a electroforezei este ca instrument pentru analiza ADN-ului în biologia moleculară, dar este folosită și în criminalistică ca mijloc de identificare a probelor de la locul crimei. Este important ca sursele de erori ale acestei tehnici să fie reduse la minimum pentru a obține rezultate exacte. O sursă de eroare este contaminarea probei de ADN. Dacă există ADN străin în probă, gelul va avea mai multe benzi decât s-ar găsi într-un gel care conține doar proba purificată.
Probleme cu gelul, curentul și tamponul
•••IndiaImages / iStock / Getty Images
Concentrația gelului trebuie să fie, de asemenea, corectă pentru a evita erorile. Dacă concentrația este prea mare sau prea mică, fragmentele vor migra fie prea încet, fie prea repede. Acest lucru va duce la erori în rezolvarea diferitelor benzi. În timpul ciclului de electroforeză, trebuie avut grijă să se asigure că tensiunea este constantă. Orice fluctuații ale tensiunii vor avea ca rezultat migrarea nesigură a fragmentelor de ADN, ceea ce va duce la erori în citirea benzilor. Soluția tampon trebuie să aibă, de asemenea, o compoziție corectă, întrucât un tampon cu pH greșit sau concentrație ionică va schimba forma fragmentelor de ADN, schimbându-și, de asemenea, timpul de migrare.
Vizualizare corectă
•••Editura Ingram / Editura Ingram / Getty Images
Cel mai important, gelul trebuie vizualizat corect. Dacă concentrația vopselei sau a sondei radioactive utilizate pentru a vizualiza probele este prea mare, imaginea rezultată va fi foarte dezordonată, deoarece fragmentele reziduale vor fi, de asemenea, vizualizate. Dacă concentrația de gel este prea mică, nu va exista vizualizare. Când procesele corecte au fost urmate în toate etapele, electroforeza pe gel va da rezultate exacte și care pot fi utilizate cu mare încredere. Ca și în cazul tuturor procedurilor științifice, electroforeza pe gel poate fi predispusă la erori, dar acestea pot fi reduse la minimum cu o pregătire și manipulare adecvate.