Componentele de bază ale unui HPLC

Cromatografia lichidă de înaltă performanță este o tehnică pentru analiza de laborator a unui amestec. Este un tip eficient de cromatografie care folosește presiune ridicată, mai degrabă decât gravitația, pentru a propulsa o probă dintr-un amestec printr-o coloană. Se injectează o probă, apoi o pompă conținând cantități mari de presiune ajută la deplasarea probei de-a lungul unei coloane ambalate, unde este separată în componente individuale. Această separare este apoi analizată de un detector pentru a produce rezultate.

Pentru a fi injectat într-un HPLC, o probă trebuie mai întâi dizolvată într-un solvent lichid polar, de preferință unul cu spectre HPLC cunoscute, astfel încât datele sale să poată fi distinse de cele ale probei. Soluția lichidă care conține proba este plasată în instrument și este trimisă în coloană. Locația reală a locului de injectare depinde de marca instrumentelor. În majoritatea cazurilor, procesul de injecție este automatizat, dar în unele cazuri un lucrător de laborator trebuie să injecteze proba folosind un ac de seringă mic.

Componenta pompei unității HPLC este necesară deoarece asigură presiunea care propulsează proba prin coloană. Puterea pompei variază, dar una puternică poate produce o presiune de până la 6.000 psi, sau lire sterline pe inch pătrat, care se aplică după injectarea probei. Acest lucru permite eșantionului să treacă prin coloană mai rapid și mai eficient decât dacă ar picura folosind doar forța gravitațională.

Viteza crescută a unei probe trecute prin coloană de o pompă permite utilizarea unui alt tip de coloană decât cele utilizate în cromatografia lichidă simplă. Materialul de ambalare din coloană poate avea o dimensiune a particulelor mult mai mică, ceea ce mărește suprafața și, prin urmare, ajută interacțiunile probei cu coloana. Majoritatea coloanelor HPLC funcționează prin polaritate. Proba este dizolvată într-un solvent polar, iar coloana este alcătuită în mare parte din hidrocarburi nepolare. Părțile polare ale moleculei eșantionului trec foarte repede prin coloană deoarece interacționează în primul rând cu solvent, în timp ce componentele nepolare ale eșantionului rămân în coloană, formând interacțiuni slabe cu coloana componente. Prin urmare, componentele eșantionului ies din coloană în ordine de la cele mai polare la cele mai nepolare.

Detectoarele variază, de asemenea, în funcție de tipul instrumentului HPLC utilizat. Cu toate acestea, majoritatea funcționează în același mod de bază. O sursă de lumină ultravioletă strălucește pe componentele eșantionului separate pe măsură ce se desprind din coloană. Majoritatea compușilor organici absorb o anumită cantitate de lumină, astfel încât pe măsură ce trec pe lângă fasciculul de lumină aplicat, un detector poate prelua cantitatea de lumină absorbită. Detectorul înregistrează, de asemenea, timpul de păstrare a componentelor pe baza ordinii în care acestea ies din coloană. Această ieșire poate fi apoi analizată pe baza zonei de vârf pentru a determina natura exactă a componentelor eșantionului.