Os químicos usam cromatografia líquida de alto desempenho, ou HPLC, para separar misturas de compostos. Em geral, o método consiste em injetar uma amostra em uma coluna onde se mistura com um ou mais solventes. Diferentes compostos são adsorvidos ou “colados” na coluna em diferentes graus; e conforme o solvente empurra os compostos através da coluna, um dos componentes da mistura sairá da coluna primeiro. O instrumento detecta os compostos conforme eles saem da coluna e produz um cromatograma que consiste em um gráfico com o tempo de retenção no eixo x e a intensidade do sinal do detector no eixo y. Conforme os compostos saem da coluna, eles produzem “picos” no cromatograma. Em geral, quanto mais distantes e mais estreitos forem os picos no cromatograma, maior será a resolução. Os cientistas consideram uma resolução de 1.0 ou superior para representar uma separação adequada.
Meça as larguras de dois picos adjacentes no cromatograma observando onde os valores do eixo x estão na base de cada pico. O eixo x representa o tempo de retenção, geralmente medido em segundos. Assim, se um pico começa em 15,1 segundos e termina em 18,5 segundos, sua largura é (18,5 - 15,1) = 3,4 segundos.
Determine os tempos de retenção observando o tempo, ou seja, a localização no eixo x, que corresponde às localizações dos máximos dos picos. Esse valor normalmente estará na metade do caminho entre os dois valores usados para calcular a largura na etapa 1. O exemplo dado na etapa 1, por exemplo, exibiria um máximo em cerca de 16,8 segundos.
Calcule a resolução, R, entre dois picos por:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
onde RT1 e RT2 representam os tempos de retenção dos picos 1 e 2, e W1 e W2 representam as larguras dos picos tomadas em suas bases. Continuando o exemplo das etapas 2 e 3, um pico exibe um tempo de retenção de 16,8 segundos e uma largura de 3,4 segundos. Se o segundo pico exibisse um tempo de retenção de 21,4 segundos com largura de 3,6 segundos, a resolução seria:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Coisas que você precisa
- Cromatograma de HPLC
- Calculadora