A clonagem de TA é um método simples e conveniente de subclonar produtos da reação em cadeia da polimerase (PCR). "TA" é a abreviação de "timina" e "adenina". Esta técnica de clonagem utiliza a capacidade da timina de hibridizar com a adenina na presença de ligases. As enzimas de restrição não são usadas, ao contrário do método tradicional de subclonagem. Em vez disso, os produtos de PCR são amplificados usando enzimas polimerases Taq.
Método
O método de clonagem TA usa a atividade de transferase terminal de certas saliências de ácido desoxirribonucleico em cada extremidade do produto de PCR.
Um vetor de clonagem linearizado com saliências de três primer (3'-T) simples, denominado vetor T, é usado para clonar este produto de PCR em um vetor plasmídeo. O produto de PCR é misturado com este vetor em alta proporção.
A DNA ligase (T4 ligase) é adicionada à mistura, o que permite que os dois produtos se hibridizem e se unam.
Vantagens e desvantagens
A clonagem de TA é um método conveniente de subclonar produtos de PCR no vetor linearizado e é muito mais simples e rápido do que os métodos tradicionais de subclonagem. Como este método não usa enzimas de restrição, produtos sem sítios de enzimas de restrição podem ser clonados.
Uma desvantagem é que os kits de clonagem de TA são muito caros e, portanto, seu uso é limitado. Além disso, não há clonagem direcional; portanto, a probabilidade de clonagem em uma direção oposta é maior.
Kits de clonagem TA
Vários fabricantes vendem kits de clonagem TA. Alguns são Invitrogen, QIAGEN e Premier Biosoft.