Seu professor lhe entrega uma amostra de bactéria e pergunta: Quantos microrganismos viáveis existem nesta amostra? O que isso significa e como você descobre isso? Um método é encontrar o número de Unidades formadoras de colônias(CFU).
O que são CFU?
UFC refere-se ao número de colônias individuais de qualquer microrganismo que cresce em uma placa de mídia. Este valor, por sua vez, representa o número de bactérias capazes de se replicar à medida que formaram colônias na placa. Existe uma fórmula CFU que envolve amostragem.
Como você encontra o CFU?
Contar o número de bactérias em uma amostra líquida é muito difícil. Eles são muitos e são muito pequenos. Além disso, alguns deles podem estar mortos e outros vivos, e os mortos não devem ser contabilizados no total. Você está interessado apenas em viável bactérias, ou bactérias que podem se replicar. Então, como você pode descobrir quantas bactérias você tem?
Da mesma forma que você pode fazer uma votação com 1.000 pessoas e aplicá-la a 10.000 pessoas para descobrir como elas podem pensar sobre um determinado assunto. Você pode tentar pegar uma pequena parte de sua amostra original, descobrir quantas bactérias existem em essa parte e, em seguida, calcule para aproximar quantos poderia ter havido no original amostra.
Usando diluições para encontrar CFU
O procedimento para encontrar CFU de uma determinada amostra envolve primeiro a diluição dessa amostra. As diluições são então semeadas em placas com o meio de crescimento correto. Muitas vezes, diluições múltiplas são uma boa ideia, uma vez que a amostra original pode ser muito concentrada.
Depois de permitir que as bactérias cresçam nas placas por um determinado período de tempo, colônias individuais são contados em um prato. Se a amostra estava muito concentrada, então, em vez de colônias individuais, você verá uma grande área coberta com crescimento bacteriano, que é chamada de grama. Isso significa que você deve diluir ainda mais sua amostra e tentar cultivar novamente para que possa ver as colônias individuais.
Como as colônias individuais vêm de uma única bactéria que se replicou muitas vezes, apenas essas contam para a UFC.
Procedimento Experimental para Encontrar CFU
Um exemplo de uso de diluições para fazer um cálculo de UFC poderia ser o seguinte: Primeiro, da amostra inicial que seu professor lhe dá, você pega 1 mL e coloca em placa. No dia seguinte, você vê que há um gramado de bactérias. Isso significa que você não pode contar o número de CFU. O próximo passo é fazer algumas diluições.
Primeiro, você pega 1 mL da amostra e dilui em 9 mL de meio líquido. Uma vez que a diluição é uma parte da amostra para nove partes do diluente, é referida como uma diluição de 1:10. Então, você pega 1 mL da diluição 1:10 e adiciona a 9 mL de meio líquido. Esta diluição é uma diluição de 1: 100. Por último, você faz uma diluição de 1: 1.000 tomando 1 mL da diluição 1: 100 e adicionando 9 mL de meio líquido. Para cada diluição, você agora tem 10 mL de cultura bacteriana diluída.
Diluições feitas, você coloca 0,5 mL das diluições nas placas. Certifique-se de rotular as placas com as quais a diluição foi banhada.
No dia seguinte, você volta e vê que todas as placas têm algumas colônias individuais. Você quer escolher um prato entre 30 e 300 colônias. Você vê que a placa de diluição 1: 1.000 tem cerca de 10 colônias, o que significa que você diluiu demais a amostra. Essa placa não vai ser útil para encontrar UFC.
A placa de diluição 1:10 tem muitas colônias, talvez mais de 300. Nesse caso, você pode ir para a placa 1: 100. Você conta as colônias nesta placa e descobre que ela tem 179 colônias. Isso significa que 0,5 mL da diluição 1: 100 contém 179 CFU. Mas e a amostra original?
O que é cálculo de CFU?
Agora que você tem alguns dados, pode fazer o cálculo de CFU na amostra original.
1. Pegue a quantidade que você semeou (0,5 mL) e multiplique pelo fator de diluição (0,01) para render 0,005. Você deve fazer isso para encontrar o fator de diluição que gerou sua contagem de CFU. Aqui, meio mililitro da diluição 1: 100 permitia contar CFU.
2. Divida o CFU da diluição (179) pelo resultado da Etapa 1 (0,005) para render 35.800 CFU.
Isso significa que o 1 mL original da amostra diluída contém 35.800 UFC. Outra forma de colocar isso é dizer que a amostra original tem 35.800 UFC / mL.
CFU é uma ótima ferramenta para descobrir quantas bactérias, fungos ou quaisquer microrganismos existem em uma determinada amostra. O método de galvanização descrito aqui é particularmente útil para amostras muito concentradas ou organismos que não crescem bem em cultura líquida.
