Uma das maneiras clássicas de determinar a concentração de micróbios em uma amostra é diluir a amostra, cultivar os micróbios em placas e contar as colônias. Os micróbios em placas crescem de uma unidade formadora de colônias que consiste em uma ou mais células em uma colônia visível que pode ser vista e contada. As bactérias são o micróbio mais comum para avaliar usando contagens de placa. A contagem de colônias é usada para detectar e contar micróbios no solo, na água e nos alimentos. Os protocolos para contagem de colônias enfatizam uma abordagem precisa e metódica.
Diluindo Amostras, Plaqueamento e Incubação
Se você simplesmente espalhar uma amostra de micróbio em uma placa de ágar, verá tantas unidades formadoras de colônias que as colônias individuais se misturarão, tornando-as impossíveis de contar. Para resolver este problema, misture a amostra em um meio líquido, pegue uma pequena quantidade dessa mistura e dilua ainda mais. Repita esse processo de seis a 10 vezes. Espalhe a diluição final em uma placa de ágar e incube por quatro a sete dias antes de contar as colônias.
Contagem Manual
O truque principal na contagem de colônias é contar cada ponto da colônia uma vez. Uma abordagem é colocar a placa de Petri em uma grade de fundo e contar as colônias em cada célula da grade, movendo-se em um padrão metódico por todas as células. Marcar as colônias contadas no verso da placa de Petri também pode ser uma abordagem útil. Geralmente, você precisará contar pelo menos três pratos; Use placas contendo de 30 a 300 colônias para fazer inferências robustas, sugere a Microbiology Network, empresa que presta serviços de consultoria a laboratórios e fabricantes. As placas com colônias numerosas demais para serem contadas ou com poucas colônias precisam ser revestidas com uma nova diluição.
Contagem Automatizada
O erro humano aumenta o tempo envolvido na contagem manual das colônias. Para melhorar a precisão e eficiência, coloque a placa de Petri em um dispositivo de contagem de colônias automatizado. Contadores de colônias automatizados obtêm uma imagem do prato, separam as colônias do fundo e usam um algoritmo para contar as colônias no prato. Os algoritmos podem ter dificuldade em diferenciar colônias quando duas ou mais colônias estão se tocando nas bordas, portanto, esta é uma área de desenvolvimento de software contínuo.
Tornando a contagem mais complicada
A precisão do cálculo da densidade de micróbios a partir da contagem de colônias tem algumas limitações. As unidades formadoras de colônias podem ser uma única célula, uma cadeia de células ou um grupo inteiro de células. A suposição é que uma colônia representa uma célula, portanto, as concentrações calculadas a partir da contagem de colônias podem ser baixas. Micróbios diferentes precisam de condições de crescimento diferentes, e as colônias na placa representam apenas os micróbios que prosperam nesse meio de crescimento sob essas condições de incubação. Além disso, a contagem de colônias não registra células mortas, uma consideração importante quando você precisa da concentração de células na amostra original.