Ao testar o efeito do pH na atividade enzimática, você deve variar o pH. No entanto, você pode fazer isso de maneiras boas ou ruins. Lembre-se de quais fatores extras podem confundir os efeitos da variação do pH. Caso contrário, os resultados obtidos podem não ser devido à mudança no pH, mas a algum outro fator. Saber como variar adequadamente o pH e quais fatores confundem o pH de um experimento o ajudará a obter bons resultados e entender por que seus resultados podem não ser exatamente o que você esperava.
Mude apenas uma coisa
Ao testar o efeito do pH na atividade da enzima, varie apenas o pH enquanto mantém outros fatores constantes. Esses outros fatores incluem concentração de enzima, concentração de substrato e temperatura. Os fatores que permanecem constantes são chamados de variáveis de controle. As variáveis de controle permitem concluir que os resultados da atividade enzimática obtidos em seu experimento são devidos à variação do pH, a variável independente. Saber quais fatores não devem ser alterados em um experimento é tão importante quanto saber quais fatores devem variar, caso contrário, será difícil concluir se os resultados são realmente devido ao que foi testado.
Escolha um ácido ou uma base
O pH de uma solução pode ser alterado dissolvendo diferentes quantidades de um ácido ou base em água. Uma maneira de testar o efeito do pH na atividade enzimática é adicionar gradualmente gotas de um ácido ou base forte na solução que contém a enzima e, em seguida, observe o ponto em que a atividade da enzima diminui ou pára. Um ácido é definido como um composto que doa um íon de hidrogênio, denominado próton (H +), e uma base é definida como um composto que doa um íon hidróxido (-OH). Diferentes ácidos e bases têm diferentes números de prótons ou íons hidróxido para distribuir. Nem todos os prótons ou íons hidróxido são doados imediatamente quando um ácido ou base é adicionado a uma solução, mas o número de prótons ou íons hidróxido doados muda o pH em taxas diferentes. Portanto, é uma boa ideia variar o pH em um experimento de enzima usando apenas um tipo de ácido ou um tipo de base. Caso contrário, outras variáveis são adicionadas acidentalmente.
Os tecidos também mudam o pH
Alguns experimentos de laboratório que estudam a atividade enzimática envolvem triturar tecido fresco para liberar as enzimas das células e, em seguida, adicionar substrato para medir a atividade enzimática. O tecido fresco contém sangue. Devido à presença de enzimas no sangue que transformam o gás dióxido de carbono dissolvido no sangue em ácido carbônico, o próprio tecido pode afetar o pH. Assim, em experimentos que envolvem atividade enzimática em tecido fresco, é útil lavar o sangue em um copo de água fria antes de triturar o tecido. Isso irá minimizar a mudança não intencional de pH devido ao tecido, de modo que a mudança proposital no pH possa ser estudada.
Mantenha os mesmos tamanhos
Conforme discutido acima, a concentração da enzima é um fator de controle que não deve ser variado ao testar o efeito do pH na atividade da enzima. No entanto, os procedimentos experimentais ainda variam inerentemente a concentração da enzima de maneiras sutis. Se alguém estiver usando uma solução pura de enzimas, mantenha a concentração da enzima constante. No entanto, em experimentos em que a enzima é proveniente de tecido fresco, como pedaços de batata, pedaços de plantas ou pedaços de fígado, o tamanho dos pedaços muda a quantidade de enzima em cada tubo de ensaio. Assim, será útil cortar os pedaços de tecido o mais uniformemente possível. Este é outro exemplo de como saber o que não mudar e por que é difícil não evitar a mudança completamente ajuda a interpretar os resultados da variação de um fator como o pH.