Faça um gráfico da concentração do produto em função do tempo para os dados do primeiro tubo de ensaio do ensaio enzimático. Observação: o eixo horizontal deve ser "tempo" e o eixo vertical deve ser "concentração do produto".
Calcule a linha de regressão linear para os pontos de dados que você plotou na Seção 1, Etapa 1. Embora o Excel e as calculadoras gráficas possam determinar facilmente este modelo linear, você pode derivar uma estimativa da regressão inclinação da linha, dividindo a diferença na concentração do produto entre os pontos de dados adjacentes por sua diferença no tempo.
Registre a inclinação da linha de regressão linear da Seção 1, Etapa 2 como "velocidade de reação inicial (Vo)." Nota: no modelo de linha de regressão "[concentração do produto] = m [tempo] + b," o coeficiente "m" é o inclinação.
Repita as etapas 1, 2 e 3 para o resto dos tubos de ensaio do ensaio.
Plote o inverso da concentração de substrato para cada tubo de ensaio versus o inverso de sua velocidade de reação inicial (da Seção 1, Etapa 4). Por exemplo, se a velocidade inicial de um tubo de ensaio com uma concentração inicial de substrato de 50 micromolar (uM) foi de 80 uM / s, os inversos seriam 1/50 uM para a concentração de substrato e 1/80 uM / s para o inicial velocidade. Nota: a concentração inversa do substrato deve estar no eixo horizontal e a velocidade inicial inversa deve estar no eixo vertical.
Nota: a concentração do substrato deve estar no eixo horizontal e a velocidade de reação inicial deve estar no eixo vertical.
Determine a linha de regressão linear para o gráfico que você traçou na Seção 2, Etapa 1. Nota: porque você precisará saber a interseção y para a linha de regressão, você deve inserir os pontos de Seção 2, Etapa 1 no Excel ou em uma calculadora gráfica e usar a modelagem de regressão embutida funcionalidade.
Divida 1 pela interseção y da linha de regressão linear. Isso lhe dará o valor do inverso de Vmax, a velocidade máxima de reação da enzima. Nota: se o modelo de regressão linear assumir a forma "[Vo inverso] = m [Conc. Substrato inverso] + b," então o valor de "b" seria a interseção y. Divida 1 por "b" para calcular o inverso de Vmax.
Divida 1 pelo resultado da Seção 2, Etapa 3 para calcular o valor real de Vmáx.
Determine a concentração da enzima no ensaio original (veja os dados brutos). Nota: a concentração da enzima é a mesma para todos os tubos de ensaio; apenas as concentrações de substrato variam no ensaio.
Divida o Vmax (da Seção 2, Etapa 4) pela concentração da enzima (da Seção 2, Etapa 5). O resultado é o valor de Kcat.
Um copywriter baseado em Chicago, Andy Pasquesi tem vasta experiência escrevendo para automotivo (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), serviços financeiros (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), clientes de saúde (Abbott) e bens de consumo (Sony, Motorola, Knoll). Ele é bacharel em inglês pela Universidade de Harvard, mas não se importa com a vírgula de Oxford.