Obliczanie miana wirusa to skomplikowany sposób na stwierdzenie, że naukowiec liczy liczbę wirusów w określonej próbce. Aby obliczyć miana wirusów, naukowcy infekują płytki rosnących bakterii roztworami wirusów o różnych stężeniach i obliczyć liczbę wirusów w oryginalnym roztworze, licząc bakterie, które padły z powodu wirusa zakażenie.
Załóż rękawiczki, napełnij 10 probówek hodowlanych 9 ml bulionu i oznacz je „10^-1”, „10^-2”, „10^-3” i i tak dalej aż do „10^-10”. Probówki te będą używane do seryjnych rozcieńczeń wirusa stosowanych do obliczania faga miano. Ponieważ wirusy mogą rosnąć do niewiarygodnie wysokich stężeń, należy je rozcieńczyć, aby skutecznie je policzyć. Każda probówka reprezentuje dziesięciokrotne rozcieńczenie wirusa.
Pobierz 1 ml wymieszanej kultury z probówki oznaczonej „10^-1” i przenieś ją nową pipetą do następnej probówki, oznaczonej „10^-2”. Wymieszaj również tę probówkę.
Kontynuuj ten wzór, aby utworzyć serię rozcieńczeń seryjnych. Otrzymasz 9 tub po 9 ml i 1 tubkę po 10 ml. Miano wirusa w twoich probówkach będzie rozcieńczone od 10 razy (twoja pierwsza probówka) lub 100 razy (twoja druga probówka) do dziesięciu miliardów razy (ostatnia probówka).
Dodaj dwie krople kultury bakteryjnej do agaru i delikatnie wymieszaj. Są to bakterie, które zostaną zabite, co pozwala policzyć liczbę cząsteczek wirusa w danym roztworze.
Dodać 1 ml każdego seryjnego rozcieńczenia do odpowiedniej probówki agarowej, gdy probówki są jeszcze w gorącej łaźni wodnej. Na przykład, 1 ml twojego seryjnego rozcieńczenia 10^-1 należy umieścić w probówce agarowej oznaczonej „10^-1”.
Wymieszać każdą probówkę, a następnie wlać każdą probówkę na płytkę Petriego z odpowiednią etykietą. Spowoduje to utworzenie cienkiej warstwy agaru, która została zaszczepiona bakteriami i wirusami na każdej płytce. Pozostaw płytki na noc w inkubatorze.
Wyjmij swoje płytki z inkubatora i zbadaj je. Powinieneś zobaczyć mętne obszary na całej płytce, w których rozwinęły się bakterie, z wyjątkiem małych wyraźnych plam zwanych płytkami. Te łysinki to łaty martwych bakterii, a każda łysinka reprezentuje jednego wirusa.
Weź liczbę płytek na talerzu i pomnóż przez 10. Jeśli policzysz 157 tabliczek, otrzymasz 1570.
Pomnóż liczbę otrzymaną w poprzednim kroku przez odwrotność liczby na probówce do rozcieńczania. Na przykład, jeśli wybrana płyta była płytą 10^-5, pomnożysz 1570 przez 10^5, aby otrzymać 157000000. Ta końcowa liczba to twoje miano fagów i reprezentuje liczbę wirusów na ml twojej oryginalnej kultury.
