Twój nauczyciel wręcza ci próbkę bakterii i pyta: Ile żywych mikroorganizmów znajduje się w tej próbce? Co to oznacza i jak to rozgryźć? Jedną z metod jest znalezienie liczby jednostki tworzące kolonie(jtk).
Czym są CFU?
CFU odnosi się do liczby pojedynczych kolonii dowolnego drobnoustroju, który rośnie na płytce pożywki. Ta wartość z kolei reprezentuje liczbę bakterii zdolnych do replikacji podczas tworzenia kolonii na płytce. Istnieje formuła CFU, która obejmuje pobieranie próbek.
Jak znaleźć CFU?
Liczenie bakterii w próbce płynnej jest bardzo trudne. Jest ich za dużo i są za małe. Co więcej, niektórzy z nich mogą być martwi, a inni żywi, a zmarli nie powinni wliczać się do całości. Interesuje Cię tylko wykonalny bakterie lub bakterie, które mogą się replikować. Jak więc obliczyć, ile masz bakterii?
W ten sam sposób, w jaki możesz przeprowadzić ankietę 1000 osób i zastosować ją do 10 000 osób, aby dowiedzieć się, jak mogą myśleć na określony temat. Możesz spróbować pobrać małą część swojej oryginalnej próbki, dowiedzieć się, ile bakterii jest w tę część, a następnie obliczyć, aby w przybliżeniu określić, ile mogło być w oryginale próba.
Wykorzystanie rozcieńczeń do znalezienia CFU
Procedura znajdowania CFU danej próbki obejmuje najpierw jej rozcieńczenie. Rozcieńczenia wysiewa się następnie na płytki z odpowiednią pożywką wzrostową. Wielokrotne rozcieńczenia są często dobrym pomysłem, ponieważ oryginalna próbka może być bardzo stężona.
Po umożliwieniu namnażania się bakterii na płytkach przez określony czas, pojedyncze kolonie są liczone na talerzu. Jeśli próbka była zbyt skoncentrowana, zamiast pojedynczych kolonii zobaczysz duży obszar pokryty bakteriami, który nazywa się a which trawnik. Oznacza to, że należy dodatkowo rozcieńczyć próbkę i spróbować ponownie rosnąć, aby zobaczyć poszczególne kolonie.
Ponieważ pojedyncze kolonie pochodzą z jednej bakterii, która wielokrotnie się replikowała, tylko one liczą się do CFU.
Eksperymentalna procedura znajdowania CFU
Przykład użycia rozcieńczeń do obliczenia CFU może wyglądać następująco: Po pierwsze, z początkowej próbki otrzymanej od nauczyciela bierzesz 1 ml i wysiewasz na płytki. Następnego dnia widzisz trawnik bakterii. Oznacza to, że nie możesz policzyć liczby CFU. Następnym krokiem jest wykonanie pewnych rozcieńczeń.
Najpierw bierzesz 1 mL próbki i rozcieńczasz ją w 9 mL płynnych pożywek. Ponieważ rozcieńczenie składa się z jednej części próbki na dziewięć części rozcieńczalnika, określa się je jako rozcieńczenie 1:10. Następnie bierzesz 1 mL rozcieńczenia 1:10 i dodajesz je do 9 mL płynnych pożywek. To rozcieńczenie jest rozcieńczeniem 1:100. Na koniec wykonujesz rozcieńczenie 1:1000, biorąc 1 ml rozcieńczenia 1:100 i dodając 9 ml płynnego podłoża. Na każde rozcieńczenie masz teraz 10 ml rozcieńczonej kultury bakteryjnej.
Po wykonaniu rozcieńczeń wysiewa się 0,5 ml rozcieńczeń na płytki. Upewnij się, że oznaczyłeś płytki, którymi posiano rozcieńczenie.
Następnego dnia wracasz i widzisz, że na wszystkich płytkach znajdują się pojedyncze kolonie. Chcesz wybrać talerz między 30 i 300 kolonii. Widzisz, że płytka z rozcieńczeniem 1:1000 ma około 10 kolonii, co oznacza, że nadmiernie rozcieńczono próbkę. Ta płytka nie będzie pomocna w znalezieniu CFU.
Płytka do rozcieńczania 1:10 ma wiele kolonii, może więcej niż 300. W takim razie możesz przejść na płytę 1:100. Liczysz kolonie na tej płytce i stwierdzasz, że ma 179 kolonii. Oznacza to, że 0,5 ml rozcieńczenia 1:100 zawiera 179 CFU. Ale co z oryginalną próbką?
Co to jest obliczanie CFU?
Teraz, gdy masz już trochę danych, możesz wykonać obliczenia CFU w oryginalnej próbce.
1. Weź wysianą ilość (0,5 ml) i pomnóż przez współczynnik rozcieńczenia (0,01), aby uzyskać 0,005. Musisz to zrobić, aby znaleźć współczynnik rozcieńczenia, który dał twoją liczbę CFU. Tutaj pół mililitra rozcieńczenia 1:100 pozwoliło policzyć CFU.
2. Podzielić CFU z rozcieńczenia (179) przez wynik z etapu 1 (0,005), aby otrzymać 35 800 CFU.
Oznacza to, że oryginalny 1 ml rozcieńczonej próbki zawiera 35 800 CFU. Innym sposobem przedstawienia tego jest stwierdzenie, że oryginalna próbka ma 35 800 CFU/mL.
CFU to świetne narzędzie do sprawdzenia, ile bakterii, grzybów lub jakichkolwiek drobnoustrojów znajduje się w danej próbce. Opisana tutaj metoda posiewu jest szczególnie pomocna w przypadku bardzo stężonych próbek lub organizmów, które nie rosną dobrze w płynnej kulturze.