Podczas chromatografii cienkowarstwowej technik umieszcza plamy mieszaniny chemicznej na płaskiej płytce pokrytej warstwą materiału absorbującego, a następnie umieszcza dolną część płytki w rozpuszczalniku. Gdy rozpuszczalnik przesuwa się w górę płyty, chemikalia w mieszaninie poruszają się z nim w różnym tempie, więc rozdzielają się. Ten test określa, które chemikalia znajdują się w mieszaninie, porównując prędkości podróży nieznanych ze znanymi normami. Na wyniki może jednak wpływać wiele czynników.
TL; DR (zbyt długi; Nie czytałem)
Na wartości współczynnika retencji w chromatografii cienkowarstwowej mają wpływ absorbent, rozpuszczalnik, sama płytka chromatograficzna, technika aplikacji oraz temperatura rozpuszczalnika i płytki.
Czynniki retencji
Współczynnik retencji substancji chemicznej podczas chromatografii cienkowarstwowej jest miarą tego, jak daleko przesuwa się ona w górę płytki w odpowiedzi na ruch rozpuszczalnika. Ponieważ bezwzględny ruch substancji chemicznej zależy od tego, jak daleko przemieszcza się rozpuszczalnik, oblicza się wartości współczynnika retencji w stosunku do stopnia ruchu rozpuszczalnika. Współczynnik retencji dla substancji chemicznej to odległość w pionie przemieszczona przez substancję chemiczną od miejsca, w którym się znajdowała pierwotnie nałożony na płytkę, podzielony przez odległość przebytą przez rozpuszczalnik — mierzoną od tego samego początku punkt.
Płytka do chromatografii cienkowarstwowej
Sama płytka do chromatografii cienkowarstwowej może wpływać na wartość współczynnika retencji uzyskaną dla danej substancji chemicznej. Płytki do chromatografii cienkowarstwowej mogą być pokryte różnymi absorbentami stałymi; najczęściej krzemionka lub tlenek glinu. Ponieważ współczynnik retencji opiera się na względnym powinowactwie substancji chemicznej do absorbentu w porównaniu z rozpuszczalnikiem, zmiana absorbentu może znacznie zmienić współczynnik retencji. Ponadto grubość i jednolitość warstwy absorbenta może różnić się w zależności od płyty, zwłaszcza jeśli są one wykonane ręcznie. Czynniki te mogą również zmienić wartość współczynnika retencji dla chemikaliów.
Czynniki retencji wpływu rozpuszczalnika
Ponieważ rozpuszczalnik przenosi substancję chemiczną w górę płytki, konkretny stosowany rozpuszczalnik będzie również miał istotny wpływ na wartość współczynnika retencji dla substancji chemicznej. Rozpuszczalnik, który ma silniejsze oddziaływanie z konkretną substancją chemiczną, łatwiej pokona każdą powinowactwo substancji chemicznej do warstwy chłonnej i przesuwanie tej substancji chemicznej dalej w danym okresie czas. Mieszaniny rozpuszczalników mogą również mieć różne skutki w zależności od proporcji każdego rozpuszczalnika.
Inne czynniki
Istnieje kilka innych czynników, które w niektórych przypadkach mogą wpływać na współczynnik retencji. Temperatura rozpuszczalnika i płytki może nieznacznie zmienić, ponieważ na przykład rozpuszczalnik często lepiej rozpuszcza transportowane chemikalia w wyższych temperaturach. Technika nakładania próbki na płytkę przez technika może również zmienić współczynnik retencji. Nałożenie zbyt dużej ilości próbki może skutkować dużymi, rozproszonymi pasmami substancji chemicznej przemieszczającymi się w górę płytki, co utrudnia dokładny pomiar odległości, na jaką substancja chemiczna została przetransportowana.