Roztwory buforowe są odporne na zmiany pH, ponieważ zawierają słabe koniugaty kwasowo-zasadowe, które neutralizują jony H+ i OH-. Roztwory buforowe składają się ze słabych kwasów lub zasad oraz soli tego kwasu lub zasady. Wybór odpowiedniego systemu buforowego zależy od zakresu pH do buforowania. Większość reakcji biologicznych zachodzi w zakresie pH od 6 do 8. Bufory fosforanowe buforują w zakresie pH od 6,5 do 7,5. Bufory kwasu karboksylowego są przydatne od pH 3 do 6. Bufory boranowe działają od pH 8,5 do 10. Bufory aminokwasowe, takie jak glicyna i histydyna, działają w różnych zakresach pH. Bufor Tris jest jednym z najczęściej używanych systemów buforowych w laboratoriach biologicznych. Obliczenia dla roztworu buforowego Tris zostaną zastosowane w poniższym przykładzie, ale metodologia ma zastosowanie do dowolnego roztworu buforowego.
Użyj iloczynu molarności i objętości roztworu końcowego, aby określić liczbę moli wymaganej zasady. Na przykład, jeśli potrzebne są 2 litry 0,1 M roztworu buforu Tris, wymagana liczba moli Tris wynosi:
Oblicz wymaganą masę buforu, mnożąc liczbę moli potrzebnych przez masę cząsteczkową zasady. Na przykład masa 0,2 mola zasady Tris wynosi:
Rozpuść bazę w wodzie destylowanej za pomocą mieszadła magnetycznego i gorącej płyty mieszającej. Rozpuścić go w objętości wody tylko nieznacznie mniejszej niż objętość roztworu końcowego (950 do 975 ml na każdy litr roztworu końcowego). pH buforu Tris zmienia się wraz ze stężeniem i wymaga ponownej regulacji, jeśli użyto zbyt małej początkowej objętości. Najlepiej jest również przygotować bufor w tej samej temperaturze, w jakiej będzie używany podczas testu lub eksperymentu, ponieważ Tris ma duże zależne od temperatury zmiany pH.
Wskazówki
- Aby zaoszczędzić czas podczas przygotowywania roztworu buforowego, można użyć gotowych koncentratów buforowych o wymaganym pH i rozcieńczyć do pożądanej molarności i objętości. Przygotuj roztwór buforowy w tej samej temperaturze, w jakiej będzie używany, aby uniknąć znacznych zmian pH. Unikaj czasochłonnego dostosowywania pH, miareczkuj dopiero po rozcieńczeniu do pożądanego stężenia. Rozpuszczenie w zbyt małej objętości prowadzi do powtórnych miareczkowania.
Ostrzeżenia
- Zachowaj ostrożność podczas obchodzenia się z kwasami i zasadami. Nosić okulary ochronne.
o autorze
Carla Boulianne jest z wykształcenia biologem ewolucyjnym, a z zamiłowania niezależną pisarką. Oprócz pisania dla Demand Studios i eHow, jest także autorką artykułów dla Parenting a Gifted Child w Suite101.com. Pasjonuje ją odkrywanie nowych tematów poprzez szeroko zakrojone badania.
Kredyty fotograficzne
Zdjęcie dzięki uprzejmości Emmi P. @morguefile.com