En av de klassiske måtene å bestemme konsentrasjonen av mikrober i en prøve er å fortynne prøven, dyrke mikrober på plater og telle koloniene. De belagte mikrober vokser fra en kolonidannende enhet bestående av en eller flere celler til en synlig koloni som kan sees og telles. Bakterier er den vanligste mikroben for å vurdere ved bruk av platetall. Kolonitelling brukes til å oppdage og telle mikrober i jord, vann og mat. Protokoller for telling av kolonier understreker en nøyaktig og metodisk tilnærming.
Fortynnende prøver, plating og inkubasjon
Hvis du bare smører en mikrobe prøve på en agarplate, vil du se så mange kolonidannende enheter at de enkelte koloniene vil blande seg sammen, noe som gjør dem umulige å telle. For å løse dette problemet, bland prøven inn i et flytende medium, ta en liten mengde av blandingen og fortynn den ytterligere. Gjenta denne prosessen seks til ti ganger. Spred den endelige fortynningen på en agarplate og ruge den i fire til syv dager før du teller koloniene.
Manuell telling
Det primære trikset i å telle kolonier er å telle hver kolonipunkt en gang. En tilnærming er å sette petriskålen på en rutenettbakgrunn og telle koloniene i hver rutenettcelle, og bevege seg i et metodisk mønster gjennom alle cellene. Merking av tellede kolonier på baksiden av petriskålen kan også være en nyttig tilnærming. Vanligvis må du telle minst tre plater; bare bruk plater som inneholder 30 til 300 kolonier for å lage robuste slutninger, antyder Microbiology Network, et firma som tilbyr konsulenttjenester til laboratorier og produsenter. Plater med kolonier som er for mange til å telle eller med for få kolonier, må omplates fra en ny fortynning.
Automatisert telling
Menneskelige feil legger til tiden involvert i å telle kolonier manuelt. For å forbedre både nøyaktighet og effektivitet, plasser petriskålen i en automatisk kolonitelling. Automatiserte kolonidisker tar et bilde av parabolen, skiller ut koloniene fra bakgrunnen og bruker deretter en algoritme til å telle koloniene på platen. Algoritmene kan ha vanskeligheter med å skille kolonier når to eller flere kolonier berører kantene, så dette er et område med pågående programvareutvikling.
Gjør telling mer komplisert
Nøyaktigheten av å beregne mikrobetetthet fra kolonitellinger har noen begrensninger. Kolonidannende enheter kan være en enkelt celle, en kjede av celler eller en hel celleklump. Antagelsen er at en koloni representerer en celle, så konsentrasjoner beregnet fra kolonitellinger kan være lave. Ulike mikrober trenger forskjellige vekstforhold, og koloniene på platen representerer bare de mikrober som trives på det vekstmediet under de inkubasjonsbetingelsene. I tillegg registrerer ikke kolonitelling døde celler, noe som er viktig når du trenger konsentrasjonen av celler i den opprinnelige prøven.