Høyytelses væskekromatografi (HPLC) er en laboratorieteknikk som brukes til å skille og identifisere forbindelser. Det er en type kolonnekromatografi som er avhengig av forskjellige polariteter av forbindelser i en løsning for å skille dem. HPLC skiller seg fra standard kolonnekromatografi fordi det bruker trykk for å tvinge løsningen raskere gjennom kolonnen, og derfor gir raskere, og noen ganger mer nøyaktige, resultater. Målet er å skille forbindelser i kolonnen og få dem til å gå ut separat.
På grunn av hastigheten til HPLC og den er avhengig av forskjellige polariteter av forbindelser, to forbindelser med lignende struktur og polariteter kan gå ut av kromatografiapparatet samtidig eller nesten den samme tid. Dette er kjent som koelusjon. Coelution gjør det vanskelig å bestemme nøyaktig hvilken del av blandingen som elueres på hvilket tidspunkt.
HPLC bruker vanligvis en glassøyle fylt med perler laget av forskjellige materialer. Blandingene som blir presset gjennom kolonnen har kjemikalier som binder med forskjellige styrker til perlene. Styrken til bindingen, som avhenger av likheten i polaritet, bestemmer hvor lenge kjemikaliet vil binde seg til vulsten før den slippes ut. Noen forbindelser binder så sterkt at de i det vesentlige aldri frigjøres fra perlene i kolonnen og måles aldri i løsningen som kommer ut av kolonnen.
Typiske laboratorieseparasjonsteknikker innebærer å utvikle en analyse eller separasjonsmetode, og deretter implementere den analysen for å skille individuelle forbindelser fra en løsning. Imidlertid resulterer dette vanligvis i flere løsninger som også må gjennomgå prosedyrer, noe som fører til en eksponentiell økning i kompleksitet. Selv om HPLC ofte kan forenkle og øke hastigheten på denne prosessen, kan kostnadene ved å utvikle et HPLC-apparat bli enorme. Å utvikle et HPLC-apparat, selv om det er mye mer effektivt, er mye dyrere enn å utvikle andre analyser for separering av forbindelser. Dette gjør det ikke økonomisk levedyktig for mange små privateide laboratorier.
HPLC brukes ikke bare til å skille enkle forbindelser, det brukes også til å isolere spesifikke proteiner ut av en cellulær blanding. I dette tilfellet er perlene i kolonnen vanligvis belagt med et antistoff som er spesifikt for proteinet du trenger å samle. Proteinene binder antistoffene og den gjenværende løsningen føres gjennom kolonnen, deretter frigjøres proteinene ved hjelp av en annen løsning og samles. Dette krever at en dyktig tekniker til enhver tid overvåker kolonnen og sørger for at prosessen kjører akkurat som planlagt.