HPLC tilbyr en rask, automatisert og svært nøyaktig metode for å identifisere visse kjemiske komponenter i en prøve, men den kan være kostbar, kompleks og fungerer ikke for alle prøvene. Medisinske, rettsmedisinske laboratorier, miljø- og produksjonslaboratorier bruker teknikken til å kvantifisere og skille kjemikaliene i en prøve. HPLC har både fordeler og ulemper sammenlignet med andre teknikker.
HPLC og lignende teknikker
Som andre former for kromatografi tillater HPLC separasjon av kjemiske bestanddeler ved bruk av en mobil fase og en stasjonær fase. Den mobile fasen er flytende og den stasjonære fasen er solid. Fordi de forskjellige komponentene beveger seg i forskjellige hastigheter, skiller de seg fra hverandre. Alternative teknikker inkluderer kapillærelektroforese, der stoffer vandrer gjennom løsninger i en elektrisk felt og andre kromatografiske metoder som utvinning av fast fase, gasskromatografi og tynt lag kromatografi.
Hastighet, effektivitet og nøyaktighet
Sammenlignet med andre kromatografiske teknikker, for eksempel TLC, er HPLC ekstremt rask og effektiv. Den bruker en pumpe, i stedet for tyngdekraften, for å tvinge et flytende løsningsmiddel gjennom et fast adsorberende materiale, med forskjellige kjemiske komponenter som skiller seg ut når de beveger seg i forskjellige hastigheter. Prosessen kan fullføres på omtrent 10 til 30 minutter, og den gir høy oppløsning. Den er nøyaktig og svært reproduserbar. Fordi det i stor grad er automatisert, kan grunnleggende HPLC-kjøringer utføres med minimal trening.
Kostnad og kompleksitet
Til tross for fordelene, kan HPLC være kostbart, og krever store mengder dyre organiske stoffer. Teknikker som utvinning av fast fase og kapillærelektroforese kan være billigere og enda raskere, spesielt for analyse under god fremstillingspraksis. Selv om det er relativt enkelt å bruke eksisterende HPLC-metoder, kan det være komplisert å feilsøke problemer eller å utvikle nye metoder. Dette er i stor grad på grunn av en rekke forskjellige moduler, kolonner og mobilfaser.
Følsomhet og oppløsning
Generelt er HPLC allsidig og ekstremt presis når det gjelder å identifisere og kvantifisere kjemiske komponenter. Med mange trinn involvert, er presisjonen til HPLC i stor grad ned til prosessen som er automatisert og derfor svært reproduserbar. HPLC har lav følsomhet for visse forbindelser, og noen kan ikke oppdages ettersom de er irreversibelt adsorbert. Flyktige stoffer skilles bedre fra ved gasskromatografi.