TA-klonering is een eenvoudige en handige methode om polymerasekettingreactieproducten (PCR) te subkloneren. "TA" is een afkorting voor "thymine" en "adenine". Deze kloneringstechniek maakt gebruik van het vermogen van thymine om te hybridiseren met adenine in aanwezigheid van ligasen. Er worden geen restrictie-enzymen gebruikt, in tegenstelling tot de traditionele subkloneringsmethode. In plaats daarvan worden PCR-producten geamplificeerd met behulp van Taq-polymerasen-enzymen.
Methode
De TA-kloneringsmethode maakt gebruik van de terminale transferase-activiteit van bepaalde overhangende desoxyribonucleïnezuur aan elk uiteinde van het PCR-product.
Een gelineariseerde kloneringsvector met enkele, drie prime-T (3'-T) overhangen, een T-vector genaamd, wordt gebruikt om dit PCR-product in een plasmidevector te kloneren. Het PCR-product wordt in hoge verhouding met deze vector gemengd.
DNA-ligase (T4-ligase) wordt aan het mengsel toegevoegd, waardoor de twee producten kunnen hybridiseren en samenkomen.
Voor-en nadelen
TA-klonering is een handige methode voor het subkloneren van PCR-producten in de gelineariseerde vector, en het is veel eenvoudiger en sneller dan traditionele subkloneringsmethoden. Omdat bij deze methode geen restrictie-enzymen worden gebruikt, kunnen producten zonder restrictie-enzymplaatsen worden gekloond.
Een nadeel is dat TA-kloneringskits erg duur zijn en daardoor beperkt in gebruik. Bovendien is er geen directioneel klonen; dus de kans op klonen in tegengestelde richting is groter.
TA-kloonkits
Verschillende fabrikanten verkopen TA-kloonkits. Sommige zijn Invitrogen, QIAGEN en Premier Biosoft.