Je leraar geeft je een bacteriemonster en vraagt je: Hoeveel levensvatbare micro-organismen zitten er in dit monster? Wat houdt dit in en hoe kom je er achter? Een methode is door het aantal te vinden Kolonievormende eenheden(KVE).
Wat zijn CFU's?
CFU verwijst naar het aantal individuele kolonies van elk micro-organisme dat op een plaat met media groeit. Deze waarde vertegenwoordigt op zijn beurt het aantal bacteriën dat in staat is zich te repliceren wanneer ze kolonies op de plaat hebben gevormd. Er is een CFU-formule waarbij steekproeven worden genomen.
Hoe vind je CFU?
Het tellen van het aantal bacteriën in een vloeibaar monster is erg moeilijk. Het zijn er te veel en ze zijn te klein. Bovendien kunnen sommigen van hen dood zijn en anderen levend, en de doden mogen niet meetellen voor het totaal. U bent alleen geïnteresseerd in rendabel bacteriën of bacteriën die zich kunnen vermenigvuldigen. Dus hoe kun je erachter komen hoeveel bacteriën je hebt?
Op dezelfde manier waarop je een peiling van 1000 mensen kunt nemen en deze op 10.000 mensen kunt toepassen om erachter te komen hoe zij over een bepaald onderwerp zouden kunnen denken. Je kunt proberen een klein deel van je originele monster te nemen, erachter te komen hoeveel bacteriën er in zitten dat deel, en bereken dan om te schatten hoeveel er in het origineel zouden kunnen zijn monster.
Verdunningen gebruiken om CFU te vinden
De procedure om CFU van een bepaald monster te vinden, omvat eerst het verdunnen van dat monster. De verdunningen worden vervolgens uitgeplaat op platen met het juiste groeimedium. Meerdere verdunningen zijn vaak een goed idee, omdat het oorspronkelijke monster erg geconcentreerd kan zijn.
Nadat de bacteriën een bepaalde tijd op de platen hebben kunnen groeien, individuele kolonies worden op een bord geteld. Als het monster te geconcentreerd was, ziet u in plaats van individuele kolonies een groot gebied bedekt met bacteriegroei, wat a. wordt genoemd gazon. Dit betekent dat je je monster verder moet verdunnen en opnieuw moet proberen te groeien, zodat je individuele kolonies kunt zien.
Aangezien individuele kolonies afkomstig zijn van een enkele bacterie die zichzelf vele malen heeft gerepliceerd, tellen alleen deze mee voor de CFU.
Experimentele procedure voor het vinden van CFU
Een voorbeeld van het gebruik van verdunningen om een CFU-berekening uit te voeren, zou als volgt kunnen zijn: Ten eerste, van het eerste monster dat je leraar je geeft, neem je 1 ml en plaats je het op een plaat. De volgende dag zie je dat er een gazon van bacteriën is. Dit betekent dat u het aantal CFU's niet kunt tellen. De volgende stap is het maken van enkele verdunningen.
Eerst neemt u 1 ml monster en verdun het in 9 ml vloeibare media. Aangezien de verdunning één deel monster op negen delen verdunningsmiddel is, wordt dit een 1:10 verdunning genoemd. Vervolgens neemt u 1 ml van de 1:10-verdunning en voegt u dat toe aan 9 ml vloeibare media. Deze verdunning is een verdunning van 1:100. Ten slotte maak je een verdunning van 1:1000 door 1 ml van de 1:100 verdunning te nemen en 9 ml vloeibare media toe te voegen. Voor elke verdunning heb je nu 10 ml verdunde bacteriecultuur.
Verdunningen gedaan, u plaat 0,5 ml van de verdunningen op platen. Zorg ervoor dat u de platen labelt waarmee de verdunning is uitgeplaat.
De volgende dag kom je terug en zie je dat op alle platen enkele individuele kolonies staan. Je wilt een bord kiezen tussen 30 en 300 kolonies. Je ziet dat de 1:1.000 verdunningsplaat ongeveer 10 kolonies heeft, dus dat betekent dat je het monster te veel hebt verdund. Die plaat zal niet helpen bij het vinden van CFU.
De 1:10 verdunningsplaat heeft veel kolonies, misschien meer dan 300. In dat geval mag je op de 1:100 plaat. Je telt de kolonies op deze plaat en ontdekt dat er 179 kolonies zijn. Dit betekent dat 0,5 ml van de 1:100 verdunning 179 CFU bevat. Maar hoe zit het met het originele monster?
Wat is CFU-berekening?
Nu u wat gegevens hebt, kunt u de CFU-berekening in het oorspronkelijke voorbeeld uitvoeren.
1. Neem de hoeveelheid die je hebt uitgeplaat (0,5 ml) en vermenigvuldig dit met de verdunningsfactor (0,01) om 0,005 te krijgen. U moet dit doen om de verdunningsfactor te vinden die uw CFU-telling opleverde. Hier kon je met een halve milliliter van de 1:100 verdunning KVE tellen.
2. Verdeel de CFU van de verdunning (179) door het resultaat van stap 1 (0,005) om 35.800 CFU op te leveren.
Dit betekent dat het oorspronkelijke monster van 1 ml dat werd verdund 35.800 CFU bevat. Een andere manier om dit te zeggen is om te zeggen dat het originele monster 35.800 CFU/ml bevat.
CFU is een geweldig hulpmiddel om te achterhalen hoeveel bacteriën, schimmels of micro-organismen er in een bepaald monster zitten. De hier beschreven uitplatingsmethode is met name handig voor zeer geconcentreerde monsters of organismen die niet goed groeien in vloeibare cultuur.