Bacteriën worden gekweekt in petrischalen op een vast medium dat bekend staat als bacteriële agar, waar zich verhoogde, cirkelvormige kolonies vormen. In tegenstelling tot een individuele bacteriële cel, is een kolonie een groep bacteriën die groot genoeg is om met het blote oog zichtbaar te zijn. Bacteriegroei kan worden gemeten door eenvoudig te observeren hoeveel kolonies aanwezig zijn; meer kwantitatieve methoden omvatten echter het gebruik van een telkamer, of vaker, levensvatbare plaattellingen. Dit laatste wordt het meest gebruikt omdat het ook kwalitatieve informatie geeft, zoals het effect van wisselende groeiomstandigheden. Aangezien er mogelijk miljarden bacteriën in een petrischaal zitten, moet het monster eerst worden verdund om het aantal kolonies te kunnen tellen.
Voeg in een reageerbuis 10 microliter van de uitgangsbacteriecultuur toe aan 90 microliter verdunningsmedium. Sluit het deksel van de buis stevig en vortex voorzichtig om een homogeen mengsel te verkrijgen. Nu is het monster een tiende van zijn oorspronkelijke concentratie.
Breng 10 microliter van dit nieuwe monster over in een nieuwe reageerbuis met 90 microliter verdunningsmedium, meng het opnieuw. Nogmaals, het resultaat is dat het monster verder wordt verdund - nu zal het een honderdste van zijn oorspronkelijke concentratie zijn. Herhaal dit meerdere keren, totdat het originele monster is verdund tussen 104 en 1010 keer. Zorg ervoor dat elke buis is gelabeld met de juiste verdunning, bijvoorbeeld 10-1, 10-2 enzovoorts.
Doseer 10 microliter van de laatste verdunning voltooid op de agarplaat. Gebruik de spreidrand om de bacteriële oplossing over het gehele oppervlak van de agarplaat te verdelen. Herhaal dit voor nog twee borden. Het is ook gebruikelijk om deze stappen uit te voeren met andere verdunningsniveaus ter vergelijking. Zorg ervoor dat u de bodems van de platen labelt. Plaats de deksels op elke plaat terug en laat de agarplaten enkele minuten drogen op een laboratoriumbank onder een vlam of in een incubator. Plaats de platen in de incubator die moet worden ingesteld op de juiste temperatuur voor de bacteriestam. Laat 12 tot 16 uur groeien.
Kolonies zouden na 16 uur zichtbaar moeten zijn; sommige genetische modificaties kunnen echter langer duren (bijvoorbeeld kleurontwikkeling). Wanneer kolonies waarneembaar zijn, haalt u de platen eruit en vindt u er tussen de 30 en 300 kolonies. Plaats met een permanente marker een stip op de bodem van de petrischaal - de kant met de agar, niet het deksel - waar een kolonie zichtbaar is door de agar. Tel elke markeerpunt. Herhaal dit voor elk gerecht.
Om de hoeveelheid bacteriën in de startcultuur voor dit experiment te meten, moet de verdunning op twee plaatsen worden omgekeerd in de berekeningen. Ten eerste, toen je één microliter uit de reageerbuis nam om in de petrischaal te doen, nam je een tiende van het verdunde monster, dus je moet alles met 10 vermenigvuldigen om dat om te keren. Bovendien, als de verdunningsfactor in de reageerbuis bijvoorbeeld 10-7, dan moet het aantal kolonies vermenigvuldigd worden met 107 om het verdunningseffect om te keren. Verwijder eenvoudig het minteken van de exponent in de berekeningen. Gebruik de formule:
[Aantal getelde kolonies] × 10 × [hoe vaak het monster moet worden vermenigvuldigd om de oorspronkelijke concentratie te krijgen: bijvoorbeeld 105] = Aantal kolonievormende eenheden (CFU) per milliliter uitgangscultuur. Dit is de bacteriegroei in je petrischaaltjes.