High-performance vloeistofchromatografie (HPLC) is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om verbindingen te scheiden en te identificeren. Het is een soort kolomchromatografie die afhankelijk is van verschillende polariteiten van verbindingen in een oplossing om ze te scheiden. HPLC verschilt van standaard kolomchromatografie omdat het druk gebruikt om de oplossing sneller door de kolom te persen en daardoor snellere en soms nauwkeurigere resultaten oplevert. Het doel is om verbindingen in de kolom te scheiden en ze afzonderlijk te laten verlaten.
Vanwege de snelheid van HPLC en het vertrouwen op verschillende polariteiten van verbindingen, twee verbindingen met vergelijkbare structuur en polariteiten kunnen het chromatografie-apparaat tegelijkertijd of bijna hetzelfde verlaten tijd. Dit staat bekend als coelutie. Coelution maakt het moeilijk om precies te bepalen welk deel van het mengsel op welk punt is geëlueerd.
HPLC gebruikt meestal een glazen kolom gevuld met kralen gemaakt van verschillende materialen. De mengsels die door de kolom worden geperst, bevatten chemicaliën die zich met verschillende sterkten aan de kralen binden. De sterkte van de binding, die afhangt van de overeenkomst in polariteit, bepaalt hoe lang de chemische stof aan de kraal zal binden voordat deze wordt vrijgegeven. Sommige verbindingen binden zo sterk dat ze in wezen nooit vrijkomen uit de korrels in de kolom en nooit worden gemeten in de oplossing die de kolom verlaat.
Typische laboratoriumscheidingstechnieken omvatten het ontwikkelen van een test of scheidingsmethode en het vervolgens implementeren van die test om individuele verbindingen uit een oplossing te scheiden. Dit resulteert echter meestal in meerdere oplossingen die ook procedures moeten ondergaan, wat leidt tot een exponentiële toename van de complexiteit. Hoewel HPLC dit proces vaak kan vereenvoudigen en versnellen, kunnen de kosten van het ontwikkelen van een HPLC-apparaat enorm oplopen. Het ontwikkelen van een HPLC-apparaat, hoewel veel efficiënter, is veel duurder dan het ontwikkelen van andere testen voor het scheiden van verbindingen. Dit maakt het voor veel kleine particuliere laboratoria financieel niet haalbaar.
HPLC wordt niet alleen gebruikt om eenvoudige verbindingen te scheiden, het wordt ook gebruikt om specifieke eiwitten uit een cellulair mengsel te isoleren. In dit geval zijn de korrels in de kolom meestal bedekt met een antilichaam dat specifiek is voor het eiwit dat u moet verzamelen. De eiwitten binden de antilichamen en de resterende oplossing wordt door de kolom geleid, waarna de eiwitten met een andere oplossing worden vrijgegeven en verzameld. Dit vereist een zeer bekwame technicus om de kolom te allen tijde te bewaken en ervoor te zorgen dat het proces precies volgens plan verloopt.