Zinātnieki izmanto plūsmas citometriju, lai atšķirtu dažādu veidu šūnas vai mikroskopiskos organismus. Tas ir rīks, ko izmanto daudzās lietojumprogrammās, piemēram, medicīniskajā diagnostikā vai tiesu medicīnas patoloģijā. Lai gan šo eksperimentālo metodi ir diezgan viegli izpildīt, iegūto sarežģīto datu analīze ar plūsmas citometru ir grūtāk daudzo eksperimentālo faktoru un / vai citometra dēļ parametriem. Tādējādi parasti citometriskos datus vizualizē un analizē, izmantojot sarežģītas profesionālās programmas, piemēram, CELLQuest vai FlowJo. Lai izprastu šo metožu rezultātus, ir nepieciešama pārzināšana ar plūsmas citometrijas paņēmieniem, mašīnām un programmatūru eksperimenti.
Precizējiet eksperimenta mērķi, uzdodot jautājumu: "Kāds tika pētītais jautājums vai hipotēze?" Tā tas būs nepieciešami, lai neapstrādātos rezultātus pielāgotu piemērotam formātam un iestatījumiem turpmākai analīzei, izmantojot statistisko citometriju programmatūru. Veiciet visas nepieciešamās izmaiņas, lai dati tiktu parādīti ar attiecīgajiem iestatījumiem (piemēram, pozitīvās šūnas, negatīvie vārti, fluorescences intensitāte, šūnu populācijas utt.).
Atrodi vārtus. Šūnas var sagrupēt vai vienkārši novērot kopā blīvuma diagrammā vai kontūru diagrammā. Grupas bieži šķiras atkarībā no viņu identitātes. Ja viena grupa ļoti intensīvi nokrāso konkrētu marķieri vai antivielas, tiek secināts, ka visiem šīs grupas dalībniekiem piemīt konkrētā šūnu tipa identitāte, kas izsaka šo marķieri. Parasti tiek atrastas šūnas, kas ir pozitīvas vairāk nekā vienam no šiem marķieriem, un šīs šūnas parasti ir starpprodukti un apzīmētas kā "dubultpozitīvas".
Paskaties uz izkliedes grafikiem. Veids, kā šūnu grupas izkliedējas izkliedes grafikā, norāda uz šūnu lielumu. Šūnas ar ļoti lieliem vai lieliem izkliedētājiem parasti ir lielas šūnas; tomēr tie var būt lieli tikai tāpēc, ka satur lielu daļu citoplazmas, vai arī tie var būt augsti, jo tiem ir ļoti liels kodols. Atkarībā no pētāmās bioloģijas tas katrā eksperimentā, protams, būs ļoti atšķirīgs.
Paskaties uz skaitļiem. Pielāgojiet diagrammas, lai uz vienas ass (parasti X ass) parādītu dažādus parametrus, vienlaikus saglabājot skaitļus uz Y ass. Tas norāda izlases kopas daļu, kas ir pozitīva šim konkrētajam parametram, jo a maksimums parasti tiek novērots pozitīvi iekrāsotā paraugā, kas nav redzams negatīvajā kontrolē paraugs.
Apskatiet vairāku parametru histogrammas. Pielāgojot X asi un Y asi, katrs norāda atšķirīgu parametru pētīta eksperimenta laikā, ir iespējams dziļāk izprast īpašības parauga. Piemēram, iestatot X asi uz sarkanu fluorescenci un Y asi uz zaļu fluorescenci, kvadranta stila vārtus var aprēķināt paraugs, lai parādītu četrus kvadranta reģionus, kuros šūnas atrodas un ir iekrāsotas vai nu sarkanai, vai zaļai fluorescencei, abām krāsām vai visi. Tas ļauj neviendabīgu paraugu sadalīt tā sastāvdaļās un vizualizēt, kā arī kvantificēt visas vienības, kas pārklājas.
Atsauces
- “Plūsmas citometrijas datu analīze”; Sjūzena Šarova; 1991
- “Plūsmas citometrija: instrumenti un datu analīze”; Mārvins Van Dila; 1985
- “Plūsmas citometrijas protokoli”; Terēza un Roberts Hovlijs; 2004
par autoru
Palmer Owyoung ir ieguvis mākslas maģistra grādu starptautiskajā biznesā Kalifornijas universitātē Sandjego un a Mākslas bakalaurs socioloģijā Kalifornijas Universitātē Santa Barbarā un ir apmācīts molekulārs biologs. Kopš 2006. gada viņš ir ārštata rakstnieks. Papildus rakstīšanai viņš ir pilna laika Forex tirgotājs un interneta tirgotājs.
Foto kredīti
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images