TA klonēšana ir vienkārša un ērta polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) produktu subklonēšanas metode. "TA" ir saīsinājums no "timīns" un "adenīns". Šis klonēšanas paņēmiens izmanto timīna spēju hibridizēties ar adenīnu ligāžu klātbūtnē. Ierobežojošos enzīmus atšķirībā no tradicionālās subklonēšanas metodes neizmanto. Tā vietā PCR produkti tiek pastiprināti, izmantojot Taq polimerāzes enzīmus.
Metode
TA klonēšanas metode izmanto noteiktas dezoksiribonukleīnskābes pārkares galīgo transferāzes aktivitāti katrā PCR produkta galā.
Linearizēts klonēšanas vektors ar vienu, trīs prime-T (3'-T) pārkarēm, ko sauc par T-vektoru, tiek izmantots, lai šo PCR produktu klonētu plazmīdu vektorā. PCR produkts tiek sajaukts ar šo vektoru lielā proporcijā.
Maisījumam pievieno DNS ligāzi (T4 ligāzi), kas ļauj abiem produktiem hibridizēties un savienoties.
Priekšrocības un trūkumi
TA klonēšana ir ērta metode PCR produktu subklonēšanai linearizētajā vektorā, un tā ir daudz vienkāršāka un ātrāka nekā tradicionālās subklonēšanas metodes. Tā kā šajā metodē netiek izmantoti restrikcijas fermenti, produktus, kuriem nav restrikcijas enzīmu vietu, var klonēt.
Trūkums ir tas, ka TA klonēšanas komplekti ir ļoti dārgi un tāpēc to izmantošana ir ierobežota. Turklāt nav virziena klonēšanas; tāpēc varbūtība klonēt pretējā virzienā ir lielāka.
TA klonēšanas komplekti
Vairāki ražotāji pārdod TA klonēšanas komplektus. Daži no tiem ir Invitrogen, QIAGEN un Premier Biosoft.