Skystas maistinių medžiagų sultinys naudojamas bakterijoms, tokioms kaip Escherichia coli, auginti. Šio sultinio receptai skiriasi priklausomai nuo bakterijų rūšies ir genetinių modifikacijų, pvz., Atsparumo antibiotikams. Sultinį galima sutvirtinti pridedant agaro, kuris leidžia bakterijoms suformuoti atskiras kolonijas, o skystoje kultūroje jos tiesiog išsisklaido visame tūryje. Tai yra pagrindinė, tačiau būtina pažangių metodų, tokių kaip genų klonavimas ar mikrobiologiniai tyrimai, technika. Šiame straipsnyje daroma prielaida, kad standartinės laboratorinės Escherichia coli padermės turi būti auginamos ant Luria sultinio (LB) agaro plokštelių (arba Petri lėkštelių).
Pasverkite 10 gramų bakterinio lygio triptono, 5 g mielių ekstrakto, 5 g natrio chlorido, 15 g agaro ar agarozės ir 1 ml 1 N natrio hidroksido. Sumaišykite juos su distiliuoto ir autoklavinio sterilaus vandens kiekiu, kol gausis 1 litras terpės. Autoklavas laikmenoms laisvai uždarytuose buteliuose ar kolbose 25 minutes. Leiskite atvėsti iki maždaug 50 laipsnių Celsijaus, prieš pridėdami reagentų, kurie bus sunaikinti esant didelei šilumai, pavyzdžiui, antibiotikus ar kitus maisto papildus.
Leiskite autoklavinėje terpėje atvėsti iki 50 laipsnių Celsijaus ir ne žemiau kaip 45 laipsnių Celsijaus, nes prieš išpilstant agarą jis įsitaisys į indą. Įsigykite sterilių Petri lėkštelių ir supilkite tiek, kad būtų padengtas visas lėkštės paviršiaus plotas ir bent pusė jos gylio. Venkite perpildyti lėkštes ir geriau, kad agaras nesiliestų su viršutiniu indo kraštu. Leiskite plokštelėms sustingti sterilioje aplinkoje (pvz., Po laminariniu srauto gaubtu), paliekant dangčius nuo dangtelio kampo.
Išdžiovinkite plokštes. Nors plokštes galima naudoti iškart, kai tik jos užsifiksuoja, agaro paviršiuje bus šiek tiek drėgmės, kuri neleis bakterijų kolonijoms pakankamai prilipti. Todėl geriausia plokštes išdžiovinti prieš dedant bakterijas, pavyzdžiui, paliekant jas atsisėsti kambario temperatūra kelias dienas arba pusvalandį po laminariniu srauto gaubtu arba 37 laipsnių Celsijaus temperatūroje inkubatorius.
Laikykite plokšteles. Džiovintos plokštės turi būti sukrautos apverstos (apverstos) ant jų dangčių ir grąžintos į originalą pakuotė, užklijuota lipnia juostele ir įvyniota į foliją, kad būtų apsaugota nuo šviesos, arba tinkama konteinerį. Visada ant plokštelių užrašykite paruošimo datą ir venkite naudoti, jei plokštelės yra senesnės nei 2 mėnesių.
Literatūra
- „Dabartiniai molekulinės biologijos protokolai“; Karen Elbing ir Roger Brent; 2002
Patarimai
- Atlikite kuo daugiau aukščiau nurodytų veiksmų (pageidautina visus) sterilioje aplinkoje (pvz., Pagal atvira liepsna arba sluoksniuoto srauto gaubtas), kad ore esantys bakteriniai teršalai nepatektų ir nesusidarytų žiniasklaida.
apie autorių
Palmeris Owyoungas turi tarptautinio verslo magistro laipsnį Kalifornijos universitete San Diege ir a Kalifornijos universitete, Santa Barbaroje, įgijęs sociologijos menų bakalaurą ir yra apmokytas molekulė biologas. Nuo 2006 m. Jis yra laisvai samdomas rašytojas. Be rašymo, jis yra visą laiką dirbantis „Forex“ prekybininkas ir interneto rinkodaros specialistas.
Nuotraukų kreditai
Jupiterimages / Comstock / Getty Images